Создание мышиной модели ожоговых инфекций патогенными бактериями

Аннотация

Источник: Wang, Y. и др. In vivo Исследование антимикробной терапии синим светом при мультирезистентных ожоговых инфекциях Acinetobacter baumannii с использованием биолюминесцентной визуализации. J. Vis. Exp . (2017)

В этом видео демонстрируется, как установить ожоговую инфекцию в модели мыши, применяя нагретый латунный блок, а затем патогенный бактериальный инокулум. Бактерии колонизируют открытый внеклеточный матрикс и образуют биопленку, что позволяет in vivo изучать взаимодействия хозяина и патогена.

Протокол

Все процедуры, связанные с животными моделями, были рассмотрены местным институциональным комитетом по уходу за животными и ветеринарным советом JoVE.

1. Мышиная модель ожоговой инфекции, вызванной биолюминесцентным Acinetobacter baumannii

1. Используйте взрослых самок мышей BALB/C возрастом 7-8 недель и весом 17-19 г. Дайте мышам привыкнуть к лабораторным условиям как минимум 3 дня до начала эксперимента. Поддерживайте мышей в 12-часовом цикле свет/темнота при комнатной температуре 21 °C и давайте им еду и воду на свободу.
2. Анестезиируйте мышей внутрибрюшной инъекцией коктейля кетамина и ксилазина (100 мг/кг–20 мг/кг). Легко коснитесь пальпы каждой мыши ватной палочкой; отсутствие пальпебрального рефлекса указывает на соответствующую глубину анестезии. Накройте глаза мыши ветеринарной мазью, чтобы предотвратить их пересыхание во время наркоза.
3. Сбрийте мышей по спине, чтобы максимально открыть кожу, используя машинку для волос с 50 лезвиями.
4. Поместите крышку чашки Петри диаметром 35 мм под брюшко каждой мыши, чтобы спина оставалась относительно горизонтальной.
5. Кипятите воду в стакане на 250 мл (80% заполненной) с помощью плитки 10" x 10", 220 вольт переменного тока (VAC). Погрузите латунный блок (сечение 1 см x 1 см) в стакан до достижения термического равновесия с водой. Термическое равновесие обычно занимает <5 минут и подтверждается повторным кипячением воды в стакане.
6. Перед созданием ожоговой травмы введите превентивные анальгетики (подкожная инъекция 0,1 мг/кг бупренорфина) для облегчения боли.
7. Через десять минут после применения превентивных обезболивающих аккуратно прижимайте нагретый латунный блок к выбритому участку на спине мышей в течение 7 секунд, чтобы вызвать ожоговые раны.
   ПРИМЕЧАНИЕ: Чтобы избежать термических повреждений работников, при выполнении процедуры сжигания надевайте термостойкие перчатки.
8. Введите 0,5 мл стерильного физиологического раствора через подкожную инъекцию для предотвращения обезвоживания.
9. Через пять минут после индуцированного термического повреждения 50 мкл бактериальной суспензии с 5 x 10⁶ колониообразующими единицами (CFU) в фосфатно-буферном физиологическом растворе (PBS) на ожоги мыши с помощью пипетки. Затем, используя стерильную ватную палочку зигзагообразным движением по коже, намазываете аликвоты на ожоги для равномерного распределения бактериальных клеток в обожжённой зоне.

Материалы

Список материалов, использованных в этой статье

Имя	Компания	Каталожный номер	Комментарии
Мышь	Лаборатории Чарльза Ривер, Уилмингтон, Массачусетс	BALB/c	7-8 недель, вес 17-19 г
Acinetobacter baumannii	Армейский медицинский центр Брук, Форт Сэм Хьюстон, Техас	Клинический изолят	Инженерная люминесцентная деформация
Инсулиновые шприцы	Fisher Scientific	14-826-79	Инсулиновые шприцы BD Lo-Dose U-100 для инъекций
Хлорид натрия	Fisher Scientific	721016	0,9% хлорида натрия
Физиологический раствор с фосфатным буфером, 1x раствор	Fisher Scientific	BP24384	Стандартный фосфатный буфер, используемый во многих биомолекулярных процедурах
Инокуляционные петли	Fisher Scientific	22-363-605	Для нанесения бактериального иноклума на ожоговую поверхность мышей
Латунный блок	Small Parts, Inc., Майами, Флорида	10 мм на 10 мм	Для создания ожогов у мышей
Extreme Dragon PBI/кевларовые перчатки с высокой температурой	Superior Glove Works Ltd, Чиктовага, Нью-Йорк	PBI83514	Термостойкие перчатки
Блюда Грейнера	Sigma-Aldrich Co. LLC	P5112-740EA	35 мм ×10 мм
Цифровая плитка Corning	Cole-Parmer Instrument Company, LLC	UX-84301-65	10" x 10", 220 VAC, для кипячения
Мыши/крысы с тонкой линейкой хирургической кровати с водяным подогревом	Системы E-Z	EZ-211	Предотвращает потерю тепла и гипотермию во время операции
Ветеринарная мазь	S&K Pharma, GmbH	Kerato Biciron 5%, Augensalbe	Офтальмологическая мазь для предотвращения сухости глаз