Терапия синим светом для лекарственно-устойчивых бактериальных инфекций при ожогах в модели мыши

Аннотация

Источник: Wang, Y. и др. Исследование in vivo антимикробной терапии синим светом при многорезистентных ожоговых инфекциях Acinetobacter baumannii с использованием биолюминесцентной визуализации. J. Vis. Exp .(2017)

В этом видео демонстрируется процедура лечения ожоговых ран, вызванных биолюминесцентными, лекарственно-устойчивыми бактериями у мышей с помощью терапии синим светом, а затем биолюминесцентной визуализации для мониторинга эффективности лечения.

Протокол

Все процедуры, связанные с животными моделями, были рассмотрены местным институциональным комитетом по уходу за животными и ветеринарным советом JoVE.

1. Антимикробная терапия синим светом при лечении инфекции A. baumannii у мышей

1. Анестезия мышей с помощью внутрибрюшинной инъекции коктейля кетамина и ксилазина (100 мг/кг - 20 мг/кг). Отсутствие пальпебрального рефлекса указывает на подходящую глубину анестезии.
2. Случайным образом разделите мышей на группу, обработанную aBL (n = 10) и необработанную контрольную группу (n = 10).
3. Для группы, обработанной антимикробным синим светом (aBL), накройте глаза мышей алюминиевой фальгой, чтобы избежать чрезмерного воздействия света. Поместите ожоги мыши прямо под светодиод, излучающий светодиод (LED), с крышкой чашки Петри диаметром 35 мм под брюшком мыши, чтобы удерживать спину горизонтально.
4. Замените индикатор мощности/энергии, упомянутый в шаге 3.5, на мышь на квадратной чашке Петри. Отрегулируйте высоту мыши так, чтобы расстояние между диафрагмой светодиода и поверхностью горения мыши было равным расстоянию между диафрагмой и уровнем светового датчика измерителя мощности/энергии.
5. Облучить зараженные ожоги с радиацией 100 мВт/^см². Вводите aBL в дозах 72 Дж/^см² до достижения общей дозы 360 Дж/см^² (например, 0, 72, 144, 216, 288 и 360 Дж/см^²). После каждой дозы света проводите биолюминесцентную визуализацию для мышей.
6. Для необработанной контрольной группы проводите биолюминесцентную визуализацию ожогов мыши, используя те же временные интервалы, что и для группы, обработанной aBL.
7. Перед восстановлением мышей положите мышей на хирургическую кровать, нагреваемую водой, чтобы предотвратить потерю тепла и переохлаждение. Наблюдайте за активностью и пальпебральным рефлексом мышей до восстановления. После восстановления мышей держите их по 2-3 в клетке.

Материалы

Список материалов, использованных в этой статье

Имя	Компания	Каталожный номер	Комментарии
IVIS	PerkinElmer Inc, Уолтем, Массачусетс	IVIS Lumina серии III	Доклиническая in vivo визуализация
Светодиод с светодиодом с излучающим светом	VieLight Inc, Торонто, Канада	415 морских миль	Источник света для освещения
Измеритель мощности/энергии	Thorlabs, Inc., Ньютон, Нью-Джерси	PM100D	Детектор светового излучения
Мышь	Лаборатории Чарльза Ривер, Уилмингтон, Массачусетс	BALB/c	7-8 недель, вес 17-19 г
Acinetobacter baumannii	Армейский медицинский центр Брук, Форт Сэм Хьюстон, Техас	Клинический изолят	Инженерная люминесцентная деформация
Фосфатно-буферный физиологический раствор, 1x раствор	Fisher Scientific	BP24384	Стандартный фосфатный буфер, используемый во многих биомолекулярных процедурах
Наконечники для пипетов Fisher Scientific Redi-Tip, 1-200 мкл	Fisher Scientific	02-707-502	Наконечники пипетов
Латунный блок	Small Parts, Inc., Майами, Флорида	10 мм на 10 мм	Для создания ожогов у мышей
Extreme Dragon PBI/Кевларовые перчатки с высокой температурой	Superior Glove Works Ltd, Чиктовага, Нью-Йорк	PBI83514	Термостойкие перчатки
Блюда Грейнера	Sigma-Aldrich Co. LLC	P5112-740EA	35 мм ×10 мм
Цифровая плитка Corning	Cole-Parmer Instrument Company, LLC	UX-84301-65	10" x 10", 220 VAC, для кипячения
Мышь/крыса Thin Line с водяным подогревом хирургической кровати	Системы E-Z	EZ-211	Предотвращает потерю тепла и гипотермию во время операции
Ветеринарная мазь	S&K Pharma, GmbH	Kerato Biciron 5%, Augensalbe	Офтальмологическая мазь для предотвращения сухости глаз