Визуализация морфологических изменений у бактерий с помощью флуоресцентной микроскопии живых клеток

Abstract

Источник: Brzozowski, R. S. и др. Микроскопия флуоресценции живых клеток для изучения локализации субклеточного белка и изменений морфологии клеток у бактерий. J. Vis. Exp . (2019)

В этом видео демонстрируется флуоресцентная микроскопия живых клеток для визуализации морфологических изменений бактерий в реальном времени. В нём изложены этапы визуализации, таймлапс-сбора и деконволюции для получения высококачественных изображений в реальном времени.

Protocol

1. Визуализация

1. В день эксперимента включите систему микроскопа. Запустите программное обеспечение для обработки изображений (см. Таблицу материалов), кликнув на соответствующую иконку на рабочем столе. Инициализируйте микроскоп, нажав кнопку «Инициализировать микроскоп » (кнопка с изображением микроскопа) в диалоговом окне запуска программы. Убедитесь, что объектив полностью опущен с помощью крупной настройки микроскопа перед инициализацией.
   ПРИМЕЧАНИЕ: После инициализации должны появиться три дополнительных диалоговых окна помимо меню «Пуск»: resolve3D, сбор данных и монитор фильтра.
2. Капли масля ....

Materials

List of materials used in this article

Name	Company	Catalog Number	Comments
Агарозе	Биореагенты Fisher	BP160-100	Оценка по молекулярной биологии — низкая EEO
FM4-64	Инвитроген	T3166	Микроскопия
Стеклянная чаша	MatTek	P35G-1.5-14-C	Микроскопия
Микроскоп	GE	DeltaVision Elite	Кастомизированная подставка для перевёрнутого микроскопа Olympus IX-71; Индивидуальная башня для освещения и модуль подсветкивающей лампы. Цели: PLAPON 60X (N.A. 1,42, WD 0,15 мм); OLY 100X OIL (N.A. 1,4, WD 0,12 мм); DIC Prism Nomarski для 100X Objective; Камера CoolSnap HQ2; SSI Assembly 7-цветная; Камера контроля окружающей среды — непрозрачная.
PC190723	MilliporeSigma	3445805MG	Ингибитор FtsZ
SoftWorx	GE		Программное обеспечение для визуализации, поставляемое производителем