В этом видео демонстрируется метод in vitro для оценки того, как мокрота, полученная пациентом, влияет на формирование бактериальной биопленки. Используя камерные стеклы, флуоресцентное окрашивание и конфокальную микроскопию, он выявляет увеличенную толщину, изменённую архитектуру и более высокую жизнеспособную биомассу в биопленках, выращенных с мокротой, что подчёркивает роль компонентов хозяина в формировании биопленки.
Для просмотра этого контента требуется подписка на JoVE. Войдите или начните свой бесплатный пробный период.
Методическая статья
Конфокальная визуализация бактериальных биопленок, вызванных фильтратами мокроты у пациентов с муковисцидозом
213 просмотров
⸱
26 февраля 2026 г.
В этой статье
Аннотация
Протокол
Все процедуры, связанные с сбором образцов, были выполнены в соответствии с руководящими принципами института IRB.
Окрашивание биопленок и конфокальная микроскопия
- После желаемого времени роста (лучше всего 24-48 часов) удалите среду из ямок камеры и аккуратно промыйте каждую камеру 300 мкл стерильного PBS.
- Подготовьте окрашивающую смесь для биопленки, смешивая по 1 мкл каждого красителя (в комплекте жизнеспособности) на каждый мл необходимого раствора. Делайте краситель в воде или в растворе медиа.
ПРИМЕЧАНИЕ: Вода рекомендована производителем.
- Добавьте 200 мкл красительной смеси в каждую ячейку с камерным стеклом и инкубуйте при комнатной температуре, в темноте в течение 45 минут.
- Удалите морилку из камер и промыйте каждую скважину 300 мкл стерильного PBS. Удалите PBS и замените его пресной водой или средой.
- Переходите к визуализации биопленок с помощью конфокальной микроскопии.
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Материалы
| Имя | Компания | Каталожный номер | Комментарии |
|---|---|---|---|
| Lab-Tek II Chambered Coverglass, боросиликат #1.5, 8-колодец | Thermo Sicher Scientific | 155409 | |
| Комплект для биофильмов Filmtracer Live/Dead | Термо Фишер Сайентифик | L10316 | |
| Миллерс ЛБ Брот | Термо Фишер Сайентифик | 12780-052 | Стандартные материалы для ночного роста гоута/биопленки |
| Фосфатно-буферный физиологический раствор (Dulbecco A) | Оксоид | BR0014G | Промывка биопленочных камер после удаления среды |
| Zeiss AxioVert 200M | Карл Цейсс |
