Моделирование кишечной инфекции у личинок данио-рерио, используя пищевые бактерии

Аннотация

Источник: Флорес, Э. и др. Использование простейшего Paramecium caudatum как средство для заражения, передающихся пищей, у личинок данио-рерио. J. Vis. Exp. (2019).

В этом видео демонстрируется метод установления пищевой модели бактериальной кишечной инфекции у личинок данио-рерио, кормя их парамециями, инфицированными флуоресцентной кишечной палочкой.

Протокол

1. Пищевая инфекция данио-рерио
   1. Инкубировать бактерии с Paramecia.
      1. Подготовьте совместную культуру Paramecium caudatum и Escherichia coli MG1655 накануне инфекции. Объедините 8 мл среды E3, 1 мл продолжающейся парамеционной культуры и 1 мл культуры E. coli MG1655 (_{OD 600} = 1.0), ревзвешенных в 1x E3 в колбах для тканевой культуры T25. Инкубировать колбы при комнатной температуре (RT) на ночь. Для каждого лечебного заболевания подготовьте две фляжки парамеций.
      2. Ин....

Результаты

Рисунок 1: Колонизация данио-рерио бактериями. Данио-рерио при 5 dpf остались неинфицированными (A) или колонизированы mCherry, экспрессирующими (B), E. coli или (C) Salmonella e.......

Материалы

Список материалов, использованных в этой статье

Имя	Компания	Каталожный номер	Комментарии
Paramecium caudatum, живой	Каролина	131554	Нет, не храните культуры ниже комнатной температуры
0,4% раствор Trypan Blue	Sigma	T8154-20ML	жидкий, стерильно фильтрованный, подходящий для культивирования клеток; Приготовлено в 0,81% хлорида натрия и 0,06% фосфата калия, дибазовый
Диметилсульфоксид (DMSO)	Sigma	276855-100МЛ	Храните в шкафу с растворителями
Escherichia coli, MG1655	ATCC	ATCC 700926	может быть заменён любым другим непатогенным штаммом E. coli
Окраска FM 4-64FX	Термо Фишер	F34653	Aliquot и Store Frozen
Формальдегид	Sigma	F8775-4X25ML
LB Broth	Sigma	L3397-1KG
Соляные таблетки с буфером фосфатов	Термо Фишер	18912014
Тетрациклин	Sigma	87128-25G	токсичный, раздражительный
Трикаин (этил3-аминобензоат метансульфонат)	Sigma	E10521-10G
Triton X-100	Sigma	X100-100ML
Раствор Trypan Blue, 0,4%	Sigma	93595-50МЛ
Агароза с низкой температурой плавления UltraPure	Термо Фишер	16520050
Гемоцитометр или счётчик клеток	любой
Стереомикроскоп	любой
Настольная центрифуга
Микроволновка
Вращательное колесо
Нагреваемый встряхивающий инкубатор
Водные сооружения
Резервуары для размножения