В этом видео демонстрируется протокол мониторинга колонизации бактерий, связанных с корнями, на саженцах Arabidopsis thaliana , выращиваемых в безпочвенной системе. После колонизации бактерии вытесняются с помощью соникации, затем разбавляются, покрыты и инкубируются для формирования колоний, отражающих прикрепление и жизнеспособность бактерий.
Для просмотра этого контента требуется подписка на JoVE. Войдите или начните свой бесплатный пробный период.
Методическая статья
Мониторинг бактериальной колонизации корней Arabidopsis thaliana в безпочвенной системе
306 просмотров
⸱
31 марта 2026 г.
В этой статье
Аннотация
Протокол
Сбор бактерий для жизнеспособного подсчёта клеток
ПРИМЕЧАНИЕ: Количество бактерий на корень саженца можно определить в любой момент инкубации. Колонизацию можно контролировать с 0 по 18 часов, а поддерживать — с 18 часов.
- Удалите сеянцы из сетки (рисунок 1, шаг 5). Аккуратно положите простерилизованные пламенем щипцы под листьями (но со стороны сетки) и слегка прищипните стебель. Поднимите сеянцы вверх и отстраните от сетки, чтобы вытащить корень, не сломав его. Если корень сломается, аккуратно соскребите сетчатое дно, чтобы собрать всю длину.
- Удаляйте бактерии с корней растений. Переместить бактерии в колодцы пластины с 24 лунками, содержащей 1 млddH 20. Соникизируйте образцы.
- Измерите количество бактерий на корнях.
- Провести серийное 10-кратное разбавление соникированных образцов до 10-6 разбавления в среде роста бактерий. Добавьте по 50 мкл каждого разбавления на отдельные агарные пластины и распределите стерильными стеклянными бусинами. Инкубировать пластины при оптимальной температуре для бактерий до тех пор, пока отдельные колонии не станут счётными.
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Результаты
Рисунок 1: Анализ на бактериальную колонизацию и поддержание корней A. thaliana . Саженцы A. thaliana , выращенные на стерилизованной пластиковой сетке, были перенесены в среду для роста, оптимизированную для бактерий [здесь, 0,1 ...
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Материалы
| Имя | Компания | Каталожный номер | Комментарии |
|---|---|---|---|
| 24-колодцевые пластины | BD Falcon | 1801343 | |
| Пламя | |||
| Щипцы | |||
| Инкубатор | При оптимальной температуре для роста заданных бактерий | ||
| Стерильная вода | |||
| Ультразвуковой аппарат | |||
| Насадка ультразвукового аппарата с 24 контактами | Для соникации нескольких образцов одновременно. Это можно сделать индивидуально | ||
| Стеклянные бусины | |||
| Multipetter/Repetter | |||
| Стерильные пластины с 96 скважинами | Для серийных разбавлений. Можно заменить на лампы Эппендорфа | ||
| Семена Arabidopsis thaliana | Рекомендуем Центр биологических ресурсов Arabidopsis для набора семенных запасов | ||
| Pseudomonas simiae WCS417r |
