Методическая статья

Высокоразрешающая конфокальная визуализация гемоцитов Drosophila , инфицированных патогенами

31 марта 2026 г.

В этой статье

Аннотация

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Источник: Хироясу, А. и др. Экстракция гемоцитов из личинок Drosophila melanogaster для микробной инфекции и анализа. J. Vis. Exp . (2018)

В этом видео демонстрируется высококачественная конфокальная визуализация гемоцитов Drosophila melanogaster , инфицированных Coxiella burnetii , для визуализации локализации патогена в 3D, что позволяет подробно анализировать динамику внутриклеточной инфекции и взаимодействия между хозяином и патогеном.

Протокол

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Конфокальная визуализация
    1. Настройте конфокальный микроскоп для трёхцветной съёмки DAPI (4',6-Diamidino-2-фенилиндол), EGFP (усиленный зелёный флуоресцентный белок) и mCherry. Используйте следующую настановку: возбуждение DAPI (бывшее) 405 нм, эмиссия (em) 415-480 нм; EGFP — 488 морских миль, эм — 493-564 морских миль; mCherry ex 587 нм, em 597-700 нм.
    2. Поместите образец на микроскоп и сфокусируйтесь на нём с помощью объектива с числовой апертурой (NA) 63X/1.4. Определите нужные гемоциты в поле зрения для визуализации.
    3. Регулировать мощность лазера и усиление детектора для достижения нужной экспозиции образца. Проверьте несколько z-плоскостей, чтобы убедиться, что уровень экспозиции соответствует всей толщине образца.
    4. Найдите верхние и нижние позиции на оси z целого гемоцита. Установите эти позиции как начальную и конечную позиции для z-сечения.
    5. Используйте сканирующий зум только для изображения области с гемоцитом. Часто используются коэффициенты увеличения в 3X.
    6. Соберите серию изображений с соответствующим разрешением, например, 1024 x 1024 пикселя в плоскости x-y и расстояние 0,3 мкм в измерении z.

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Материалы

Список материалов, использованных в этой статье
ИмяКомпанияКаталожный номерКомментарии
Coxiella burnetii - mCherryДоктор Хайнцен, Р.  
Стекло крышки микроскопаFisher Scientific12-545-80 
4', 6-диамидино-2-фенилиндолТермо Фишер Сайентифик62247 
Конфокальный микросопLeicaКонфокальный лазерный сканирующий микроскоп TCS SP8-X с белым светом 
Микроскопические стеклиFisher Scientific12-552-3 

Перепечатки и разрешения

Запросить разрешение на повторное использование текста или иллюстраций этой статьи JoVE

Запросить разрешение

Теги

ZCoxiella burnetii

Похожие статьи