В данном видео демонстрируется получение псевдовирусов гриппа в клетках человека с помощью трансфекции плазмид, опосредованной фосфатом кальция, что позволяет безопасно генерировать одноцикловые вирусные частицы для последующего использования, например, в тестах на нейтрализацию антителами в условиях уровня биобезопасности 2.
Для просмотра этого контента требуется подписка на JoVE. Войдите или начните свой бесплатный пробный период.
Методическая статья
Производство псевдовирусов методом трансфекции плазмид в клетки человека
142 просмотров
⸱
31 августа 2026 г.
В этой статье
Аннотация
Протокол
1. Упаковка псевдовируса с помощью кальций-фосфатной трансфекции
- Приготовьте суспензии одиночных клеток HEK293FT (9 x 105 на мл) в полной среде DMEM (модифицированная иглами среда Дульбекко) (Таблица 1). Добавьте 10 мл суспензии одиночных клеток в флакон T75 и инкубируйте клетки в инкубаторе при 37 °C и 5% углекислого газа (CO2) в течение 20 ч перед трансфекцией.
ПРИМЕЧАНИЕ: Рекомендуется использовать клетки HEK293FT с низким номером пассажа (<20 пассажей). Убедитесь, что монослой клеток слит на 80-90%. - За 2 ч до трансфекции замените среду на 10 мл свежей полной среды, содержащей хлорохин (10 ....
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Результаты
Рисунок 1: Схема кальций-опосредованной трансфекции. Данная схема описывает основные этапы процедуры кальций-опосредованной трансфекции.
....Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Материалы
| Имя | Компания | Каталожный номер | Комментарии |
|---|---|---|---|
| Хлорид кальция безводный | AMRESCO | 1B10-50G | Реагент |
| Хлорохиндифосфат | Selleck | S4157 | Реагент |
| Модифицированная Дульбекко среда Игла (DMEM) | Gibco | 1210-046 | Реагент |
| Фетальная бычья сыворотка | Gibco | 160-04 | Реагент |
| HEK293FT | Gibco | R70-07 | Линия клеток |
| HEPES СВОБОДНАЯ КИСЛОТА | AMRESCO | 0511-250G | Реагент |
| Набор ИФА на антиген p24 ВИЧ-1 | ZeptoMetrix | 801 | Набор реагентов |
| Замороженный набор для анализа люциферазы | Promega | E4530 | Набор реагентов |
| Микроцентрифужные пробирки 1.5 mL | Thermo fisher scientific | 509-GRD-Q | Расходный материал |
| Конические центрифужные пробирки Nunc 15 mL | Thermo fisher scientific | 39650 | Расходный материал |
| Пенициллин-стрептомицин | Gibco | 15140-12 | Реагент |
| Наконечники для дозатора (10 μL) | Thermo fisher scientific | TF102-10-Q | Расходный материал |
| Наконечники для дозатора (10 μL) | Thermo fisher scientific | TF13-10-Q | Расходный материал |
| Наконечники для дозатора (10 μL) | Thermo fisher scientific | TF112-10-Q | Расходный материал |
| Серологические пипетки (5 mL) | Thermo fisher scientific | 17035N | Расходный материал |
| Серологические пипетки (10 mL) | Thermo fisher scientific | 170356N | Расходный материал |
