Трансдукция комаров Промойте 100 личинок Aedes albopictus первого возраста трижды деионизированной водой, затем перенесите личинок в стакан, содержащий 95 мл деионизированной воды. Добавьте 5 мл стока рекомбинантного денсовируса Aedes aegypti (rAaeDV) (конечная концентрация 1,00 x 10¹⁰ копий/мл). Инкубируйте в течение 24 ч при 28 °C, промойте личинок трижды деионизированной водой, затем перенесите их обратно в чашки и кормите в обычном режиме. Определяйте уровень экспрессии целевого гена в личиноках с помощью кПЦР или вестерн-блоттинга. ПРИМЕЧАНИЕ: Для более точной изоляции инфицированных личинок можно использовать метод детекции флуоресцентного сигнала. Например, для обнаружения флуоресцентных сигналов от личинок, инфицированных рекомбинантным вирусом, экспрессирующим DsRed, личинок можно поместить на предметное стекло с лункой и наблюдать под инвертированным флуоресцентным микроскопом каждые 8 ч в течение 2 дней после инфицирования. После обнаружения флуоресцирующих личинок их следует распределить по отдельным пластиковым пробиркам для последующего непрерывного наблюдения. С помощью этого метода можно идентифицировать личинок с инфекцией в нескольких тканях. Лю, П., и др.Использование рекомбинантного денсовируса комаров в качестве вектора доставки генов для функционального анализа генов в личинках комаров. J. Vis. Exp. (2017)
В этом видео демонстрируется использование рекомбинантных денсовирусов комаров, кодирующих микроРНК, для сайленсинга специфических генов в личинках комаров. Инфицированные личинки ранних возрастов вырабатывают функциональные микроРНК, которые подавляют экспрессию целевых генов для последующих исследований.
