Трансдукция модели печени Доведите раствор вектора на основе аденоассоциированного вируса (AAV) до конечной концентрации 2,7 x 10^13 векторных геномов в 5 мл, добавив соответствующий объем фосфатсолевого буфера (PBS). Отсоедините печень от контура подачи среды, извлекая трубку из канюли. Подключите шприц объемом 5 мл к канюле воротной вены и введите весь объем раствора вектора AAV (5 мл). ПРИМЕЧАНИЕ: Опционально можно добавить феноловый красный (5 мкг/мл) для отслеживания распределения раствора вектора AAV по всей печени. Инкубируйте в течение 1 часа без подачи потока. Постепенно увеличивайте скорость потока: 1,25 мл/мин в течение 10 мин, 25 мл/мин в течение 20 мин и 3,75 мл/мин в течение 30 мин. Культивируйте рецеллюляризированную печень крысы в течение 6 дней. ПРИМЕЧАНИЕ: Через день заменяйте одну треть среды свежей средой (50 мл). Отбирайте пробы культуральной среды для измерения физиологических параметров, таких как активность лактатдегидрогеназы, pH проб среды, а также концентрация глюкозы и лактата. Хиллер, Т., и др.Изучение вирусных векторов в трехмерной модели печени, репопулированной клеточной линией гепатоцеллюлярной карциномы человека HepG2. J. Vis. Exp., (2016)
В данном видео демонстрируется доставка генов с помощью аденоассоциированного вируса в гуманизированный каркас печени крысы. Вектор доставляет в клетки печени трансген, кодирующий флуоресцентный репортер, и РНК для сайленсинга генов посредством рецептор-опосредованного эндоцитоза. Эта модель обеспечивает эффективную трансдукцию в перфузируемой 3D-системе тканей печени.
