Электронная микроскопия. После первичной идентификации на предметных стеклах оцените наличие гигантского вируса с помощью электронной микроскопии супернатантов культур. Нанесите 5 мкл положительного образца на сетку, прошедшую свечения descarga (glow-discharge). Выдержите примерно 20 минут при комнатной температуре. Осторожно высушите сетку и нанесите на нее небольшую каплю 1% молибдата аммония на 10 секунд. Оставьте сетку до высыхания на 5 минут. Перейдите к электронной микроскопии при 200 кэВ. Поместите сетку в держатель; введите держатель в микроскоп. Проверьте обзор вакуума, нажав на соответствующий значок. Закройте клапаны и начните наблюдение при размере пятна 5 и увеличении x 25 000. Измерьте размер гигантского вируса с помощью ImageJ или непосредственно на микроскопе, используя инструмент измерения на экране сбора данных. ПРИМЕЧАНИЕ: Относите образец к группе Faustovirus при размере капсида примерно 200 нм. Бу Халиль, Дж. Й., и др.Быстрая стратегия изоляции новых фаустовирусов из проб окружающей среды с использованием Vermamoeba vermiformis. J. Vis. Exp. (2016).
В данном видео демонстрируется получение изображений частиц фаустовируса из инфицированной культуры амеб с помощью просвечивающей электронной микроскопии. В видео описываются подготовка сеточки, негативное окрашивание молибдатом аммония для повышения контраста и визуализация вируса под микроскопом. Протокол завершается измерением размера фаустовируса с помощью интегрированных программных инструментов микроскопа.
