Все процедуры с использованием животных моделей были рассмотрены местным институциональным комитетом по уходу за животными и ветеринарным наблюдательным советом JoVE. 1. Определение секреции цитокинов методом ИФА у мышей, инфицированных γHV68 Поместите под наркоз мышей линии C57BL/6 (B6) одного пола и возраста 6–8 недель из одного помета (8–12 мышей на группу), путем внутрибрюшинного введения 1,5 мг кетамина/0,12 мг ксилазина, и проведите интраназальную инокуляцию 40 БОЕ (бляшкообразующих единиц) γHV68 в объеме 40 мкл. В разные моменты времени после заражения усыпите мышей путем вдыхания CO2 с последующим подвывихом шейного позвонка. Вскройте грудную клетку, сделав левый латеральный разрез вдоль грудины, и разрежьте ребра острыми ножницами. Извлеките ткани легких. Поместите половину ткани легкого (левую долю) в стерильные пробирки с завинчивающимися крышками объемом 1,5 мл, содержащие 500 мкл циркониево-кремниевых шариков диаметром 1,0 мм. Добавьте в пробирку 1 мл холодного бессывороточного DMEM (модифицированной среды Игла в модификации Дульбекко) и гомогенизируйте ткань легкого с помощью бисерной гомогенизации в течение 30 секунд. Охладите пробирки на льду в течение 2 минут и повторите этот процесс один раз. Центрифугируйте пробирки (15 000 x g в течение 10 минут) при 4 °C, соберите супернатант и измерьте продукцию цитокинов, как описано ниже. Определите уровень цитокинов с помощью имеющихся в продаже наборов для ИФА (иммуноферментного анализа) цитокинов в соответствии с инструкциями производителя. Чжан, Дж., и др. P. Анализ передачи сигналов врожденного иммунитета при вирусном уклонении от продукции цитокинов. J. Vis. Exp. (2014)
В данном видео демонстрируется интраназальное введение мышиного герпесвируса мышам для индуцирования специфического иммунного ответа в легких. Впоследствии ткани легких обрабатывают для получения супернатантов, содержащих цитокины, для последующей оценки иммунного ответа хозяина.
