Экспрессия Qβ Протрите рабочую поверхность смесью отбеливателя и этанола в соотношении 1:1. В асептических условиях приготовьте две стартовые культуры по 3 мл, перенося единичные колонии E. coli BL21(DE3) в 3 мл среды Super Optimal Broth (SOB). Инкубируйте культуру в течение ночи на шейкере при 250 об/мин в помещении с температурой 37 °C и относительной влажностью (rH) 0%. Инокуляция стартовой культуры в среду SOB: Снимите обе стартовые культуры по 3 мл с шейкера и в асептических условиях перелейте каждую из них в одну из двух конических колб Эрленмейера с перегородками объемом 2 л, содержащих по 1 л свежей среды SOB. Поместите инокулированную среду на шейкер при 250 об/мин в помещение с температурой 37 °C и 0% rH. Культивируйте бактерии на шейкере при 250 об/мин при 37 °C и 0% rH до достижения значения OD600 0,9–1,0. Для индукции экспрессии белка с помощью дозатора P1000 добавьте 1 мл 1 М изопропил-β-D-1-тиогалактопиранозида (IPTG). Оставьте среду на шейкере при 250 об/мин при 37 °C и 0% rH на ночь. Следующим утром снимите среду с шейкера и центрифугируйте ее в бутылях объемом 1000 мл при 20 621 × g в течение 1 ч при 4 °C для сбора клеток. Удалите супернатант и соберите клеточный осадок. Перелейте супернатант в колбу с примерно 5 мл отбеливателя для уничтожения бактерий; данный объем является отходом. С помощью шпателя соберите клеточный осадок со дна центрифужной бутыли и перенесите его в центрифужную пробирку объемом 50 мл. Чэнь, Z., и др.Создание флуоресцентных ПЭГилированных вирусоподобных частиц путем конъюгации с использованием химии диброммалеинимид-дисульфида. J. Vis. Exp. (2018)
В данном видео демонстрируется метод контролируемой экспрессии белка оболочки бактериофага Qβ в модифицированных штаммах E. coli. Полученные белки самособираются в вирусоподобные частицы, которые затем выделяют для последующей биоконъюгации.
