Наблюдение за наночастицами вируса гепатита Е (HEVNPs) с помощью просвечивающего электронного микроскопа (ПЭМ) Подготовьте или разбавьте образцы HEVNP до концентрации 0,5–2 мг/мл, используя 10 мМ 2-(N-морфолино)этансульфоновую кислоту (MES) с pH 6,2 для ПЭМ-визуализации. Ионизируйте подложки с углеродным покрытием с помощью тлеющего разряда (40 мА в течение 30 с) для создания гидрофильной углеродной поверхности. Оборудование для тлеющего разряда описано в таблице материалов. ПРИМЕЧАНИЕ: Гидрофильная углеродная поверхность подложек сохраняется только в течение 30 мин после обработки тлеющим разрядом. Удерживая подложку пинцетом, нанесите на нее 2 мкл образца HEVNP, подождите 15–30 с и промокните фильтровальной бумагой. Немедленно промойте подложку дважды дистиллированной водой (ddH2O) и промокните фильтровальной бумагой. Немедленно нанесите на подложку 2 мкл 2% раствора ацетата уранила, подождите 15 с, затем промокните фильтровальной бумагой. Высушите подложки с образцами, поместив их в электронный осушительный шкаф на ночь. Перенесите подложку в ПЭМ и проведите визуализацию при увеличении 10–80к. На ПЭМ-снимках HEVNP выглядят как пустые икосаэдрические белки диаметром около 27 нм из-за отсутствия вирусной РНК. Чэнь, С. С., и др. Функционализация поверхности наночастиц вируса гепатита E с использованием методов химической конъюгации. J. Vis. Exp. (2018)
В этом видео демонстрируются подготовка и негативное контрастирование вирусоподобных наночастиц вируса гепатита E для визуализации с помощью просвечивающей электронной микроскопии. Данный метод позволяет оценить структурную целостность самособранных частиц, состоящих только из капсида, подтверждая их однородность и чистоту с помощью изображений высокого разрешения.
