Мышиной модели слепой кишки перевязки и проколы, как ценным инструментом для изучения человеческих сепсиса.
Для просмотра этого контента требуется подписка на JoVE. Войдите или начните свой бесплатный пробный период.
Методическая статья
Слепой кишки Процедура прокола Лигирование
В этой статье
Краткое содержание
Аннотация
Сепсис у человека характеризуется набором системных реакций в ответ на интенсивную и массивную инфекцию, которую организм хозяина не смог локализовать. В настоящее время сепсис входит в десятку основных причин смертности в отделениях интенсивной терапии США 1. При сепсисе выделяют две установленные гемодинамические фазы, которые могут перекрывать друг друга. Начальная фаза (гипердинамическая) определяется как массированная выработка провоспалительных цитокинов и активных форм кислорода макрофагами и нейтрофилами, что влияет на проницаемость сосудов (приводя к гипотонии), функцию сердца и вызывает метаболические изменения, кульминацией которых становятся некроз тканей и полиорганная недостаточность. Следовательно, наиболее частой причиной смерти является острое повреждение почек. Вторая фаза (гиподинамическая) представляет собой противовоспалительный процесс, включающий нарушение презентации антигенов моноцитами, снижение пролиферации и функции лимфоцитов, а также усиление апоптоза. Это состояние, известное как иммуносупрессия или иммунодепрессия, резко повышает риск нозокомиальных инфекций и, в конечном счете, смерти. Механизмы этих патофизиологических процессов изучены недостаточно. Поскольку обе фазы сепсиса могут вызвать необратимые и непоправимые повреждения, крайне важно определить иммунологический и физиологический статус пациента. Это основная причина, по которой многие терапевтические препараты оказались неэффективными. Один и тот же препарат, введенный на разных стадиях сепсиса, может быть терапевтическим, нанести вред или не оказать никакого эффекта 2,3. Для понимания сепсиса на различных уровнях крайне важно иметь подходящую и комплексную модель на животных, которая воспроизводит клиническое течение заболевания. Необходимо охарактеризовать патофизиологические механизмы, возникающие при сепсисе, и контролировать условия модели для тестирования потенциальных терапевтических средств.
Для изучения этиологии сепсиса у человека исследователи разработали различные модели на животных. Наиболее широко используемой клинической моделью является лигатура и пункция слепой кишки (CLP). Модель CLP заключается в перфорации слепой кишки, что приводит к попаданию содержимого кишечника в брюшную полость и вызывает выраженный иммунный ответ, индуцированный полимикробной инфекцией. Данная модель воспроизводит клинически значимые условия, характерные для человека. Как и у людей, у мышей, которым проведена процедура CLP с последующей инфузионной терапией, наблюдается первая (ранняя) гипердинамическая фаза, которая со временем переходит во вторую (позднюю) гиподинамическую фазу. Кроме того, профиль цитокинов схож с профилем при сепсисе у человека, для которого характерно усиление апоптоза лимфоцитов (см. обзоры 4,5). В связи с множественностью и перекрытием механизмов, вовлеченных в развитие сепсиса, исследователям необходима подходящая модель сепсиса с контролируемой степенью тяжести для получения согласованных и воспроизводимых результатов.
Протокол
1. Лигирование слепой кишки и прокол, как мышь Модель по правам Сепсис
Для этой процедуры C57BL / 6 мышей (7-9 недель) используются.
- Анестезию мыши путем введения внутрибрюшинно раствор 1:1, кетамина (75mg/kg) и ксилазина (15мг/кг). В качестве примера можно вводить 30 мкл раствора в 1:01 мышь весом 20 граммов. Кроме того, мышь может быть анестезии ингаляционными изофлуран использования испарителя анестетиков.
- Бритье брюшко мыши и дезинфекции области, первое применение бетадин решение следует вытирая с 70% спиртом (номер 1 на рисунке последовательности ниже). Хлоргексидин может быть использован как альтернативный антис....
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Обсуждение
Здесь мы подробно показать, как выполнить модель CLP у мышей и модулировать степени тяжести.
По сравнению с другими моделями животных сепсиса, CLP могут быть выполнены в любой мыши штамма разного возраста и пола. Это относительно простой и недорогой хирургической операции. В этой модели, степень тяжести имеет непосредственное влияние на процент выживания. Длина труб, толщина иглы и число проколов являются параметрами, которыми можно управлять для модуляции тяжести / смертность CLP. Следовате.......
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Раскрытие информации
Нет конфликта интересов объявлены.
Животные были проведены в соответствии с Национальным институтом здравоохранения Руководство по уходу и использованию лабораторных животных, и утверждается ухода за животными и использовать комитета при Университете Темпл.
Животные были проведены в соответствии с Национальным институтом здравоохранения Руководство по уходу и использованию лабораторных животных, и утверждается ухода за животными и использовать комитета при Университете Темпл.
Благодарности
Эта работа была поддержана грантом Пенсильвании Министерства здравоохранения.
Доктор Мигель Гарсия Тоскано был докторской сотрудник в Университете Темпл, который финансируется Альфонсо Мартин Эскудеро Фонд в течение этого исследования.
Мы хотим поблагодарить Илья Йорданов и Кевин Kotredes для изготовления видео.
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Материалы
| Имя | Компания | Каталожный номер | Комментарии |
|---|---|---|---|
| Название реагента | Компания | Номер в каталоге | Комментарии |
| Кетамин | Ketaset | 0856-2013-01 | |
| Ксилазин | AnaSed | NADA # 139-236 | |
| 29G инсулина шприц | Exel | 26028 | |
| Шелковая нить, 6-0 PROLENE | Ethicon | 8680G | |
| 19G и 25G иглы | BD | 305186 | |
| Бритва | Генеральный питания | Генеральный питания | |
| Инфракрасные лампы Отопление | Генеральный питания | Генеральный питания | |
| Мишель раны клипы 7мм | Roboz Хирургическое Instr | RS-9270 | |
| Ухо Loop маски | Fisher Scientific | 19-130-4181 | |
| Препарирование ножницы | Roboz Хирургическое Instr | RS-6702 | |
| Бетадин раствор | VWR | 63410-992 | |
| Хирургические щипцы | Roboz Хирургическое Instr | RS-5135 | |
| 70% изопропиловый спирт площадку | Fisher Scientific | 22-031-350 | |
| Бупренорфин | Бедфорд Labs | 55390-100-10 | |
| Трамадол | Sigma-Aldrich | 42965 |
Ссылки
- Angus, D. C. Epidemiology of severe sepsis in the United States: analysis of incidence, outcome, and associated costs of care. Crit Care Med. 29, 1303-1310 (2001).
- Riedemann, N. C., Guo, R. F., Ward, P. A. The enigma of sepsis. J Clin Invest. 112,....
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Перепечатки и разрешения
