Перфузия печени мышей in vivo: метод введения раствора в печень грызуна через воротную вену

Аннотация

Источник: Кабрал, Ф., и др. Очистка гепатоцитов и синусоидальных эндотелиальных клеток от перфузии печени мыши. J. Vis. Exp. (2018).

Это видео описывает процедуру перфузии печени мыши через воротную вену с использованием раствора коллагеназы перед выделением клеток печени.

Протокол

Все процедуры, связанные с животными, были проверены местным институциональным комитетом по уходу за животными и ветеринарным наблюдательным советом JoVE.

1. Подготовка

1. Приготовление растворов и питательных сред
   1. Подготовьте все питательные среды и буфер в соответствии с таблицей материалов.
2. Подготовка инструментов
   1. Установите водяную баню (>10 л) при температуре 42 °C, перистальтический насос с регулируемой частотой вращения и зажимы для удержания колб. Подготовьте изогнутые ножницы и щипцы (рисунок 1).
   2. На водяной бане ил....

Результаты

Рисунок 1: Схематическое изображение комплекта перфузии. Колбы удерживаются на месте зажимами (не показаны); Трубка, содержащая жидкость, пересаживается из колбы объемом 1 л в колбу объемом 125 мл во время процедуры обозначена красной пунктирной линией. Обратите внимание, что подача кислорода не пузырится непосредственно в растворы в колбах. Пробки также должны иметь насечки, чтобы об.......

Материалы

Список материалов, использованных в этой статье

Имя	Компания	Каталожный номер	Комментарии
1 л фляга Эрленмейера	Научный центр Фишера	С63274
Колба Эрленмейера 250 мл	Научный центр Фишера	С63271
Силиконовые трубки	Коул-Пармер	96400-14	Эта трубка проходит от колб через насос к Т-образному разъему, а затем к шприцу объемом 1,0 мл, который подключен к катетеру.
Трубки Tygon	Научный центр Фишера	Р3603	Используется в качестве адаптера между 96400-14 и пипетками и Т-образным соединителем. Его также можно использовать для кислородных трубок.
Т-образные соединители	Коул-Пармер	EW-06294-82
Быстрое отключение	Научный центр Фишера	6150-0010
Зажимные зажимы	Научный центр Фишера	6165-0002
Насос с регулируемой частотой вращения Masterflex L/S; модель 7553-70	Коул-Пармер	EW-07559-00	Перипластический насос с регулируемой частотой вращения
Головка насоса; модель 7014-20	Коул-Пармер	EW-07014-20
Стеклянные градуированные пипетки объемом 1,0 мл	Научный центр Фишера	13-678
Изогнутые ножницы без зазубрин	Инструменты для точной науки	14069-12
Щипцы Dumont	Инструменты для точной науки	11252-20
Изогнутые щипцы	Инструменты для точной науки	13009-12
Шприц 10 мл	Научный центр Фишера	Тел.: 03-377-23	Понадобится только бочка со шприцем
Стерилизованная ложка	Магазин товаров для дома
Ватный тампон(ы)	Магазин товаров для дома
Швейные нитки из полиэстера	Магазин товаров для дома
Малярный скотч	Магазин товаров для дома
Прихватки для большого пальца	Магазин товаров для дома
Пенопластовая прокладка	Конический штатив объемом 50 мл
Противень для печенья	Магазин товаров для дома
Впитывающие пеленки	Научный центр Фишера	14-206-64
Водяная баня 19 л	Научный центр Фишера	TSCOL19
BD Insyte Autogaurd Экранированный внутривенный катетер 24 калибра	Бектон Дикинсон	381412	Пластиковый катетар с выдвижной иглой
Чашки для кристаллизации 100x50	ВВР	89000-290
Чашки Петри из полистирола	Сигма Олдрич	П5481-500ЭА
Конические пробирки объемом 50 мл	Научный центр Фишера	Тел.: 12-565-270
Градуированные пипетки (5 мл)	Научный центр Фишера	170355
Градуированные пипетки (25 мл)	Научный центр Фишера	170357
Фильтр EasyStrainer 100 мкМ	Грайнер биоуан	542000	Фильтр 100 μм
Фильтр EasyStrainer 40 мкМ	Грайнер биоуан	No 542040	Фильтр 40 μм
Реагентов
имя	соединение	Граммы (г/л)	Миллимоляр (мМ)
Буфер 1; pH 7,4	NaCl	8.3	142
	KCl	0,5	6,7
	ХЕПЕС	2.4	10
	БСА	15	0,226
Буфер 2; pH 7,4	NaCl	3.9	Сталь 66,74
	KCl	0,5	6.71
	CaCl2	0,7	6.31
	ХЕПЕС	24	100
	БСА	15	0,226
	Фенол красный	0,01	0,03
PBS; pH 7,4	NaCl	8	137
KCl	0,2	2.7
Na2HPO4-7H2O	1.15	4.3
КХ2ПО4	0,2	1.4
ДРУГИЕ РЕАГЕНТЫ
имя	компания	Каталожный номер	Комментарии
Коллагеназа IV типа	Сигма Олдрич	С5138
Изофлуран	Абкам	АБ144581

См. См. См. T См. См. См. См.