Ксенотрансплантат опухоли, полученный от пациента: метод создания экспериментальной мышиной модели для оценки уротелиально-клеточной карциномы

Аннотация

Источник: Moret, R. et al. Модели ортотопических ксенотрансплантатов, полученные от пациента, для роста опухоли уротелиально-клеточной карциномы человека и колоректального рака, а также спонтанного метастазирования. J. Vis. Exp. (2019)

Это видео описывает процедуру создания экспериментальной модели мыши ксенотрансплантата, которую можно использовать для изучения прогрессирования уротелиально-клеточной карциномы.

Протокол

Все процедуры, связанные с животными, были проверены местным институциональным комитетом по уходу за животными и ветеринарным наблюдательным советом JoVE.

1. Модель мыши UCC

1. Подготовка мышей к процедуре
   1. Приобретите самку мыши NOD/SCID в возрасте от 6 до 8 недель. Побрейте нижнюю часть спины мыши с помощью крема для эпиляции. Обезболить мышь в индукционной камере изофлураном (2,5% в 100% кислороде, 1 л/мин).
   2. После введения седативных препаратов поместите мышь в положение лежа на спине так, чтобы ее морда находилась в носовом конусе изофлурана, а голая спина была твердо закреплена на дисперсионном электроде><. ПРИМЕЧАНИЕ: Мышь полностью обездвиживается, если не реагирует на защемление пальца ноги.
2. Возьмите собранные опухолевые клетки UCC и ресуспендируйте их в среде RPMI объемом 50 μл. Вживите клетки UCC в мочевой пузырь с помощью ангиокатетера (рис. 1Aa, Ab).
   1. Установите монополярный электрокаутерный аппарат и установите его на мощность 4 Вт. Смажьте стерильный ангиокатетер 24 G смазывающим желе и введите его через мочеиспускательный канал самки мыши><. ПРИМЕЧАНИЕ: Может ощущаться небольшое сопротивление. Осторожно надавите вперед или снимите ангиокатетер и повторите. Не применяйте силу. Если катетер изгибается при входе, вставьте стерильную направляющую проволоку наполовину в катетер, чтобы обеспечить стабильность.
   2. Полностью вставьте прямую направляющую проволоку с неподвижным сердечником 0,025 дюйма на 1 мм за конец ангиокатетера.
      ПРИМЕЧАНИЕ: Перед процедурой проволока маркируется лентой, чтобы указать точку остановки 1 мм и обеспечить однородность.
   3. Удерживайте монополярный штифт на направляющей проволоке в течение 1 с, допуская электрическое раздражение слизистой оболочки мочевого пузыря.
   4. Приложите свежий стерильный ангиокатетер к шприцу Люэра-Лока объемом 1 мл и наберите 200 мкл собранных клеток.
      ПРИМЕЧАНИЕ: Не менее 100 мкл теряется из ангиокатетера в шприц. Компенсируйте объем потерь при расчете необходимого объема клеточной суспензии.
   5. Удалите направляющую проволоку и ангиокатетер из уретры мыши. Ввести ангиокатетер со шприцем с прикрепленными клетками в уретру.
      ПРИМЕЧАНИЕ: Продвижение должно стать проще, чем раньше.
   6. Закапывайте 50 мкл клеток в мочевой пузырь мыши. Подождите несколько секунд перед удалением ангиокатетера, чтобы позволить клеткам прилипнуть к стенке мочевого пузыря.
      ПРИМЕЧАНИЕ: Клетки остаются в мочевом пузыре и развиваются в первичную опухоль.

Результаты

Рисунок 1: Ортотопические модели мышей UCC. (Аа) Ангиокатетер был вставлен в мочевой пузырь самки мыши с NOD/SCID, и электрокаутерный разряд был нанесен на стенку мочевого пузыря с помощью проводниковой проволоки. (Аб) Меченные люциферазой опухолевые клетки UCC, BlCaPt15 (2 x 10⁴ клеток) или BlCaPt37 (5 x 10⁵ клеток) с добавлением 3 x 10^{5 <...}

Материалы

Список материалов, использованных в этой статье

Имя	Компания	Каталожный номер	Комментарии
Крем для эпиляции	Черч энд Дуайт Ко., Инк	1(800)248-8820
Изофлуран	Генри Шейн Здоровье животных	108333
6-8-недельные мыши NOD/SCID (самки)	Лаборатория Джексона	1303
щипцы	Симметрия Хирургик Инк	06-0011 (Английский
Электрохирургический генератор	ВаллиЛаб	FORCE1C20
Индукционная камера изофлурана	Перкин Элмер	119038

г. )