Истощение мочи и полоскание мочевого пузыря у мышей: процедура на основе катетера для опорожнения и промывания мочевого пузыря мышей

Аннотация

Источник: Yu, C. et al. Новый метод доставки плазмидной ДНК в уротелий мочевого пузыря мыши с помощью электропорации. J. Vis. Exp. (2018)

В этом видео мы описываем процедуру с помощью катетера для опорожнения и промывания мочевого пузыря модели мыши. Подготовленная мышь затем может быть использована для дальнейших экспериментальных процедур.

Протокол

Все процедуры, связанные с животными, были проверены местным институциональным комитетом по уходу за животными и ветеринарным наблюдательным советом JoVE.

1. Обезболивающее животное

1. Используйте настольную систему анестезии для обезболивания животного изофлураном. Включите бак O₂ и отрегулируйте расходомер кислорода на 1 л/мин.
2. Поместите взрослую женскую мышь C57BL/6J в индукционную камеру. Включите и отрегулируйте испаритель изофлурана на 3% для индукции. Мышь должна быть под наркозом в течение 2 мин. Ввести анальгетик бупренорфином (0,1 мг/кг) подкожно после извлечения мыши из индукционной камеры для упреждающей анальгезии.
   заметка: В этом протоколе используются самки мышей, так как с ними легче работать во время катетеризации уретры. Протокол также работает для самцов мышей, но необходима особая осторожность.
3. Нанесите офтальмологическую мазь на глаза животного для профилактики сухости. Поместите мышь под наркозом на грелку лицевой стороной вверх так, чтобы носик находился в носовом конусе. Поверните переключатель воздушного контура, чтобы изофлуран прошел через носовой обтекатель.
4. Зафиксируйте голову и носовой обтекатель скотчем. Отрегулируйте испаритель изофлурана на 2% для обслуживания.
5. Зафиксируйте конечности скотчем. Проведите тесты на защемление пальцев ног, чтобы убедиться, что животное находится под глубокой анестезией, а затем побрейте область живота.

2. Истощение мочи и полоскание мочевого пузыря

1. Нанесите смазку на катетер (24G, длина 2,11 см, внешний диаметр 0,045 см) и убедитесь, что его внешняя поверхность полностью покрыта.
2. Вставьте катетер в отверстие мочеиспускательного канала и медленно проталкивайте его, пока он не достигнет мочевого пузыря, в это время моча должна вытекать через катетер. Мягко надавите на живот, чтобы помочь истощению мочи.
   1. Проверьте, правильно ли введен катетер в мочевой пузырь, наблюдая за автоматическим оттоком мочи. Избегайте прокалывания уретры и стенки мочевого пузыря и при необходимости наносите смазку несколько раз.
3. Слейте мочу с помощью пипетки в стакан для отходов.
4. Пипетка вводит 80 мкл фосфатно-солевого буфера (PBS) в наружный конец катетера, при этом другой конец все еще находится в мочевом пузыре. Осторожно приложите к катетеру шприц объемом 1 мл. Осторожно надавите на шприц, чтобы ввести PBS в мочевой пузырь. Оставьте некоторое количество PBS в катетере, чтобы избежать образования пузырьков воздуха в мочевом пузыре.
5. Извлеките шприц. Подождите, пока PBS выйдет из мочевого пузыря. Аккуратно надавите на живот, чтобы опорожнить PBS.
6. Выбросьте PBS из катетера с помощью пипетки в стакан для отходов.
7. Повторите промывку PBS (шаги с 2.4 по 2.6) еще два раза.
   заметка: Очень важно работать аккуратно во время этих этапов мойки. Кровь в катетере или сбой автоматического оттока жидкости обычно указывает на то, что уретра пробита насквозь

Материалы

Список материалов, использованных в этой статье

Имя	Компания	Каталожный номер	Комментарии
Шприц BD 1 мл TB	рыбак	148232Э
Exel International Одноразовые катетеры Safelet для внутривенных катетеров	Научный центр Фишера	Тел.: 14-841-21	24G, длина 2,11 см, внешний диаметр 0,045 см
K&H Коврик для отдыха с подогревом для мелких животных, 9 на 12 дюймов	амазонка		Накройте тепловый коврик бумажными полотенцами
Офтальмологическая мазь	рыбак	NC0849514
PBS, pH7,4	Технологии Life	10010049
Наконечники для пипеток 200 мкл	США Сайентифик	1111-0206 (Английский)
Офтальмологическая мазь	рыбак	NC0849514
Наконечники для пипеток, Universal Fit; от 0,1 до 10 μл	рыбак	02707438(КС)
Бупренорфин	сигма	Б9275-50МГ
ПИПЕТМАН NEO P2	Гилсон	F144561
ПИПЕТМАН NEO P200N	Гилсон	F144565
Ветеринарная смазка Therio-gel	Здоровье животных PBS	353-736 (Английский)
V-1 Настольная система анестезии	ВетЭкип	901806
Изофлуран	Ветеринар один	501017
Скотч, скотч	рыбак	19047257