Доставка ДНК-плазмид в уротелий мочевого пузыря мыши: процедура на основе электропорации для эффективной доставки ДНК-плазмид в уротелиальные клетки мышиного мочевого пузыря для создания генетически модифицированных моделей

Аннотация

Источник: Chuan, Y. et al. Новый метод доставки плазмидной ДНК в уротелий мочевого пузыря мыши с помощью электропорации. J. Vis. Exp.(2018)

Это видео демонстрирует доставку плазмиды ДНК в уротелий мочевого пузыря мыши с использованием комбинации методов катетеризации уретры и электропорации. Описанная процедура позволяет создавать модели рака мочевого пузыря мышей.

Протокол

Все процедуры, связанные с животными, были проверены местным институциональным комитетом по уходу за животными и ветеринарным наблюдательным советом JoVE.

1. Подготовка плазмид и инструментов

1. Для каждого мочевого пузыря для трансфекции необходимо подготовить не менее 20 мкл ДНК-плазмиды (1 мкг/мкл).
2. Добавьте 1 μL Trypan Blue к 20 μL раствора плазмиды в микроцентрифужной пробирке объемом 1,5 мл. Пипеткой хорошо перемешать.
3. Автоклавируйте все хирургические инструменты и простерилизуйте рабочее место с помощью 70% этанола. Часто распыляйте на хирургические инструменты и перчатки 70% этанол или и....

Материалы

Список материалов, использованных в этой статье

Имя	Компания	Каталожный номер	Комментарии
Шприц BD 1 мл TB	рыбак	148232Э
Бупренорфин	сигма	Б9275-50МГ
Пинцет Дюмон	Роботизированная хирургическая инстракция	РС-5005	Обработайте 70% этанолом перед хирургическим применением
ECM830 SQ волновой электропоратор	Гарвардский аппарат	450052
Exel International Одноразовые катетеры Safelet для внутривенных катетеров	Научный центр Фишера	Тел.: 14-841-21	24G, длина 2,11 см, внешний диаметр 0,045 см
Сверхтонкие ножницы для микродиссекции	Роботизированная хирургическая инстракция	РС-5135	Обработайте 70% этанолом перед хирургическим применением
Изофлуран	Ветеринар один	501017
K&H Коврик для отдыха мелких животных с подогревом, 9 на 12 дюймов	амазонка		Накройте тепловый коврик бумажными полотенцами
Офтальмологическая мазь	рыбак	NC0849514
PBS, pH 7,4	Технологии Life	10010049
Наконечники для пипеток 200 мкл	США Сайентифик	1111-0206 (Английский)
Наконечники для пипеток, Universal Fit; от 0,1 до 10 μл	рыбак	02707438(КС)
ПИПЕТМАН NEO P2	Гилсон	F144561
ПИПЕТМАН NEO P200N	Гилсон	F144565
плазмида CAG-GFP	Адджен	16664
Платиновый пиццертрод 5 мм	Гарвардский аппарат	450489	Диаметр 5 мм
ножницы	Роботизированная хирургическая инстракция	РС-5880	Обработайте 70% этанолом перед хирургическим применением
Струнный шнур	амазонка		Мандала Crafts 150D 210D 0,8 мм 1 мм кожа шитье плоская вощеная нить шнурок шнур
Скотч, скотч	рыбак	19047257
Ветеринарная смазка Therio-gel	Здоровье животных PBS	353-736 (Английский)
Трипановая синяя морилка	Технологии Life	15250061
V-1 Настольная система анестезии	ВетЭкип	901806
Викрил фиолетовый шовный 18" FS-2 резка 5-0	рыбак	NC0578475
Walgreens Повидон Йод 10%	Грецкие орехи	953982
Зажим для раны	рыбак	18045
Аппликатор зажимов для ран	рыбак	1804 г

г. .