Методическая статья

Инкапсуляция миРНК в экзосомы с помощью электропорации: метод загрузки миРНК в экзосомы на основе электрических импульсов

30 апреля 2023 г.

В этой статье

Аннотация

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Источник: Faruqu, F. N. et al. Подготовка экзосом для доставки миРНК в раковые клетки. J. Vis. Exp. (2018)

Это видео описывает метод инкапсуляции миРНК в экзосомы, основанный на электропорации. Экзосомы, загруженные миРНК, затем могут быть использованы для терапевтических целей.

Протокол

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

1. Инкапсуляция миРНК в экзосомы методом электропорации

  1. Перед электропорацией электропораторную кювету (см. Таблицу материалов) предварительно охладить на льду в течение 30 минут.
  2. Смешайте 7,0 мкг экзосом (32 мкл из 7 x 1012/мл в PBS) с 0,33 мкг миРНК (12 мкл из 2 мкМ в воде, не содержащей РНКазы) в микроцентрифужной пробирке. Дополните объем до 150 мкл буфером лимонной кислоты (см. Таблицу материалов). Молярное соотношение экзосомы и миРНК в этом случае составляет 1:60.
  3. Переложите смесь в кювету для электропорации. Закройте крышку кюветы и поместите ее в держатель кюветы электропоратора (см. Таблицу материалов). Поверните вращающееся колесо на 180° по часовой стрелке.
    заметка: Колесо должно быть полностью повернуто в заблокированное положение, для того чтобы кювета соприкасалась с электродами.
  4. Выберите нужную программу электропорации (например, X-01, X-05, A-20, T-20, T-30 и т.д.) и запустите электропорацию, нажав кнопку пуска.
    заметка: Успешный импульс обозначается отображением «OK» на дисплее.
  5. После электропорации снимите кювету, повернув колесо назад на 180° против часовой стрелки. Извлеките образец из кюветы с помощью пластиковой пипетки для дальнейшей обработки.

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Раскрытие информации

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
Конфликт интересов не декларируется.

Материалы

Список материалов, использованных в этой статье
ИмяКомпанияКаталожный номерКомментарии
Atto655-siRNAEurogentecСК-СИРНА(с маркировкой-S) UGC-GCU-ACGAUC-GAC-GAU-G55; (Без маркировки) CAU-CGU-CGA-UCG-UAGCGC-A55.
Стеклянные пипеткиНаучный центр Фишера1156-6963 (Английский)
Амакса Нуклеофектор IЛонзаНуклеофектор IС наборами Нуклеофэктор от Amaxa
Буфер лимонной кислоты с ЭДТАСмешайте 0,1954 г лимонной кислоты и 0,2087 г динатрийфосфата в 50 мл деионизированной воды. Добавьте ЭДТА к 0,1 мМ. Отрегулируйте pH до 4,4.
Микрофуговые пробиркиСтарлабС1615-55001,5 мл

Перепечатки и разрешения

Запросить разрешение на повторное использование текста или иллюстраций этой статьи JoVE

Запросить разрешение

Теги

siRNAsiRNA

Похожие статьи