Криоконсервация мозга мышей методом мгновенной заморозки: метод быстрой заморозки целого образца мозга мыши для гистологического анализа

Аннотация

Источник: Comba, A. et al. Лазерный захват микродиссекции субрегионов глиомы для пространственной и молекулярной характеристики внутриопухолевой гетерогенности, онкопотоков и инвазии. J. Vis. Exp. (2020)

Это видео демонстрирует криоконсервацию мозга мыши для выделения дискретных анатомических областей или конкретных клеточных популяций из тканей опухоли. Этот метод имеет решающее значение для получения оптимального оптического разрешения морфологии мозговой ткани для последующего анализа.

Протокол

1. Криоконсервация мозга с опухолями глиомы

1. Перед криоконсервацией мозга приготовьте банку, наполненную холодным изопентаном/2-метилбутаном, и поместите ее в емкость, наполненную жидким азотом. Дайте растворителю остыть.
2. Извлеките мозг из 30% раствора сахарозы и промокните его насухо на фильтровальной бумаге.
3. Пометьте криомолд перманентным маркером. Осторожно добавьте примерно 5 мл OCT (оптимальный температурный состав для резки) в центр криомолда, избегая образования пузырьков воздуха.
4. Поместите мозг в криомолд, содержащий ОКТ в нужной ориентации. Заполните форму ОКТ до тех пор, пока мозг полностью не погрузится в воду. С помощью чистых щипцов быстро поместите криомолд с ОКТ и мозг в холодный изопентан/2-метилбутан.
5. Как только ОКТ затвердеет (~30–40 с), удалите криомолд вместе с мозгом и поместите его в сухой лед. Не оставляйте форму, содержащую мозг, в 2-метилбутане более чем на 2 минуты, так как это может привести к образованию трещин в твердом ОКТ. Оберните криомолд вместе с мозгом в алюминиевую фольгу и храните при температуре -80 °C.

Материалы

Список материалов, использованных в этой статье

Имя	Компания	Каталожный номер	Комментарии
Отклейте одноразовые формы для встраивания	Науки электронной микроскопии	70182
Исследовательский криостат	Лейка	КМ3050с
Салфетка-Плюс ОКТ Компаунд	Научный центр Фишера	Тел.: 23-730-571