Срез замороженной ткани мозга мыши: процедура получения тонких срезов замороженной ткани из замороженной ткани мозга мыши

Аннотация

Источник: Comba, A. et al. Лазерная микродиссекция субрегионов глиомы для пространственной и молекулярной характеристики внутриопухолевой гетерогенности, онкопотоков и инвазии. J. Vis. Exp. (2020)

В этом видео мы демонстрируем разрезание замороженной ткани опухоли мозга мыши с помощью криостата. Полученные таким образом замороженные срезы мозговой ткани хранятся при низких температурах до дальнейшего анализа.

Протокол

Все процедуры, связанные с животными, были проверены местным институциональным комитетом по уходу за животными и ветеринарным наблюдательным советом JoVE.

1. Секционирование замороженных тканей опухоли головного мозга

1. Этикетка 2 мкм полиэтиленнафталата (PEN) с информацией об образце. Срезы тканей будут размещены непосредственно на этих предметных стеклах после среза.
2. Установите температуру криостатной камеры в диапазоне от -20 до -24 °C. Перед секционированием блок образцов поместите в камеру криостата и дайте ему уравновеситься до температуры в камере в течение 30–60 минут.
3. Очистите криостатную камеру и держатель ножа 100% этанолом и опрыскайте щетки, которые будут использоваться, чистящим раствором РНКаза. Работая внутри криостатной камеры, извлеките форму и прикрепите блок ОКТ, содержащий мозг, к диску для образцов криостата с помощью ОКТ. Поместите блок в держатель диска и совместите блок с лезвием ножа.
4. Установите одноразовое лезвие в держатель для секционирования.
5. Разрез мозга на толщину 10 мкм. Убедитесь, что на ткани нет разводов или царапин. С помощью кисти осторожно разровняйте и разверните ткань на режущей поверхности.
6. Аккуратно закрепите ткань, содержащую участки мозга, на предметные стекла PEN без РНКазы. Переверните положительно заряженные стекла пальцами в направлении ткани и плавно нажмите на стеклоподъемник вниз по направлению к тканевому участку.
   заметка: Температуру рук поможет ткань приложить к стеклу.
7. После установки участков мозга на предметные стекла храните предметные стекла в коробке внутри криостатной камеры, а затем храните их при температуре -80 °C. Никогда не держите горки при комнатной температуре.
   заметка: Складчатость ткани и разрыв являются обычным явлением. Для точного заднего анализа важно свести к минимуму эти артефакты.

Материалы

Список материалов, использованных в этой статье

Имя	Компания	Каталожный номер	Комментарии
Стеклянное стекло с мембраной PEN (2 мкм)	Лиека	1150518
Исследовательский криостат	Лейка	КМ3050с
Решение для обеззараживания РНКазы Zap	Научный центр Фишера	АМ9780
Отклейте одноразовые формы для встраивания	Науки электронной микроскопии	70182
Решение Pinpoint	Исследование Zymo	Д3001-1
Салфетка-Плюс ОКТ Компаунд	Научный центр Фишера	Тел.: 23-730-571