Источник: Schildge, S. et al. Выделение и культивирование кортикальных астроцитов мыши. J. Vis. Exp. (2013)
В этом видео мы описываем метод получения чистого препарата астроцитов от новорожденных мышей.
Для просмотра этого контента требуется подписка на JoVE. Войдите или начните свой бесплатный пробный период.
Методическая статья
Выделение астроцитов: метод получения чистого препарата кортикальных астроцитов мыши
5.2K просмотров
⸱
30 апреля 2023 г.
В этой статье
Аннотация
Протокол
Все процедуры, связанные с животными, были проверены местным институциональным комитетом по уходу за животными и ветеринарным наблюдательным советом JoVE.
1. Выделение и покрытие смешанных корковых клеток
Смешанное выделение корковых клеток для культур астроцитов может быть выполнено с использованием мышиных детенышей от P1 до P4. Для достижения правильной плотности астроцитов необходимо использовать 4 коры детенышей мыши на колбу для культуры тканей Т75. Таким образом, объемы в приведенном ниже протоколе рассчитываются для клеточного препарата с использованием 4 мышиных детенышей.
- П....
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Результаты
Рисунок 1. Вскрытие постнатальной (Р3) коры головного мозга. А) Весь мозг. Б) Головной мозг после удаления обонятельных луковиц и мозжечка. В) Изоляция коры головного мозга путем отслаивания пластинчатой структуры коры головного мозга. D, D') Кора головного мозга от вентрального и дорсального участка с мозговыми оболочками (черными стрелками обозначены менингеальные артерии). Д) Кора г.......
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Раскрытие информации
Конфликт интересов не декларируется.
Материалы
| Имя | Компания | Каталожный номер | Комментарии |
|---|---|---|---|
| Среды для культивирования астроцитов | |||
| DMEM с высоким уровнем глюкозы | Технологии Life | 31966-021 | |
| FBS термоинактивированный | Технологии Life | 10082-147 | Конечная концентрация: 10% |
| Пенициллин-стрептомицин | Технологии Life | 15140-122 | Конечная концентрация: 1% |
| Решение для переваривания мозговой ткани | |||
| HBSS | Технологии Life | 14170-088 (Английский) | |
| 2,5% трипсин | Технологии Life | 15090-046 | Конечная концентрация: 0,25% |
| другой | |||
| 70% (об/об.) этанола | Рот | 9065.2 | |
| Поли-D-лизин | Миллипор А-003 | А-003-Э | |
| Вода | ПАА | С15-012 | Сорт клеточной культуры |
| ПБС | ПАА | Х15-002 | Сорт клеточной культуры |
| 0,05% Трипсин-ЭДТА | Технологии Life | 25300-062 | |
| 0,45 мкм Стерильный фильтр | Сарториус | No 16555 | |
| Чашка Петри 3,5 см | BD Falcon | 353001 | |
| Туба Falcon 15 мл | BD Falcon | 352096 | |
| Туба Falcon 50 мл | BD Falcon | No 352070 (Английский | |
| 75 см2 Колба для культуры тканей | BD Falcon | 353136 | |
| Щипцы тонкие | Дюмон | 2-1032; 2-1033 | #3c; #5 |
| Щипцы с плоским наконечником | КЛС Мартин | 12-120-11 | |
| Хирургические ножницы 13 см | Эскулап | БК-140-Р | |
| Стереомикроскоп | Лейка | МЗ7.5 | |
| Стереомикроскоп + фотоаппарат | Лейка | MZ16F; ДФК320 | |
| Микроскоп + камера | Цейсс; Канон | Primo Vert; PowerShot A650 IS | |
| центрифуга | Эппендорф | 5805000.017 | центрифуга5804R |
| Орбитальный шейкер | Термо Сайентиал | ШКЕ 4450-1СЕ | МаксQ 4450 |
| Водяная баня | Джулабо | SW20; 37 °C |
