Инактивация генов-мишеней на основе системы CreER-LoxP: индуцируемая тамоксифеном система рекомбиназы Cre для нокаута гена-мишени в мышиной модели

Аннотация

Источник: Hubner, E. K., et al. Конститутивные и индуцируемые системы для генетической модификации гепатоцитов мышей in vivo с использованием гидродинамической инъекции в хвостовую вену.J. Vis. Exp. (2018)

Это видео описывает процедуру нокаута гена-мишени с использованием тамоксифен-индуцируемой системы Cre-рекомбиназы после внутрибрюшинного введения тамоксифена в мышиной модели.

Протокол

Все процедуры, связанные с животными, были проверены местным институциональным комитетом по уходу за животными и ветеринарным наблюдательным советом JoVE.

1. Индукция трансфицированного CreER с помощью тамоксифена

ВНИМАНИЕ: Тамоксифен вреден, может вызвать рак или повредить фертильность. Пожалуйста, обратитесь к паспорту безопасности.

1. Планируйте внутрибрюшинные инъекции тамоксифена в течение трех дней подряд.
2. В 1-й день растворите 10 мг тамоксифена в 40 мкл этанола. Выдерживать при температуре 55 °C в течение 10 минут. Вортексируйте несколько раз, пока тамоксифен не растворится.
3. Добавьте 960 μL кукурузного масла. Инкубируйте в течение 5 минут при 55 °C. Встряхните несколько раз до получения прозрачного раствора.
4. Приготовьте раствор в инсулиновом шприце объемом 1 мл с иглой 27 G.
5. Загрифуйте мышку, осторожно взявшись за горлышко мыши большим и вторым пальцами, зафиксировав хвостик между основанием ладони и четвертым и пятым пальцами.
6. Введите 0,1 мл (= 1 мг тамоксифена) раствора внутрибрюшинно в левый нижний квадрант брюшной полости.
7. Повторяйте инъекции на второй и третий день.

Материалы

Список материалов, использованных в этой статье

Имя	Компания	Каталожный номер	Комментарии
Шприц Injekt F 1 мл	Браун	9166017В	Для внутрибрюшинного введения
Тамоксифен	Сигма-Олдрич	Т5648-1Г	Для активации CreER
кукурузное масло	Сигма-Олдрич	К8267-500МЛ	Носитель для инъекций тамоксифена