Индуцируемая регулируемая система экспрессии генов in vivo: индуцированная тетрациклином система экспрессии генов для активации транскрипции генов-мишеней в мышиной модели

Аннотация

Источник: Hubner, E. K. et al.Конститутивные и индуцируемые системы для генетической модификации гепатоцитов мышей in vivo с использованием гидродинамической инъекции в хвостовую вену. J. vis. Exp. (2018)

Это видео демонстрирует систему экспрессии генов тетрациклина, или Tet-On, в мышиной модели. В присутствии доксициклина, производного тетрациклина, система Tet-On, состоящая из белка-трансактиватора, управляемого обратным тетрациклином, активируется и экспрессирует интересующий ген.

Протокол

Все процедуры, связанные с животными, были проверены местным институциональным комитетом по уходу за животными и ветеринарным наблюдательным советом JoVE.

1. Индукция тетрациклин-зависимого гена или экспрессия shRNA

ВНИМАНИЕ: Доксициклин может быть вреден. Пожалуйста, обратитесь к паспорту безопасности.

ПРИМЕЧАНИЕ: В зависимости от типа и продолжительности эксперимента, доксициклин может поставляться в питьевую воду.

1. В краткосрочных экспериментах (<10 дней) доксициклин вводят с питьевой водой по следующему протоколу.
   1. Растворите 5 г сахарозы в 100 мл водопроводной воды. Автоклав.
   2. Растворите 100 мг доксициклин-гиклата в 5 мл раствора сахарозы (шаг 1.1.1) в конической пробирке объемом 15 мл.
   3. С помощью шприца объемом 10 мл стерильно отфильтровать раствор через фильтр 0,2 мкм. Добавьте в раствор сахарозы, приготовленный на шаге 1.1.1.
   4. Подайте мышке раствор доксициклина-сахарозы в качестве питьевой воды. Проверяйте ежедневно и заменяйте, когда раствор становится мутным, что указывает на чрезмерный рост бактерий (замените прозрачный раствор не позднее чем через три дня).

Материалы

Список материалов, использованных в этой статье

Имя	Компания	Каталожный номер	Комментарии
D(+)-Сахароза	Карл Рот	4621.1	Для подслащивания раствора доксицилина
Доксициклина гиклат	АпплиХим	А2951,0025	Активация тетрациклин-зависимой экспрессии
Injekt 10 мл Шприц	Браун	4606108В
Фильтропур С 0,2	Сарштедт	831.826.001	Для фильтрации доксициклина

Кабель