$$\rightleftharpoonup{xx}$$
$$\longleftharp{xx}$$,
$$\longrightharp{xx}$$,
Все процедуры, связанные с животными, были проверены местным институциональным комитетом по уходу за животными и ветеринарным наблюдательным советом JoVE.
1. Индукция тетрациклин-зависимого гена или экспрессия shRNA
ВНИМАНИЕ: Доксициклин может быть вреден. Пожалуйста, обратитесь к паспорту безопасности.
ПРИМЕЧАНИЕ: В зависимости от типа и продолжительности эксперимента, доксициклин может поставляться в питьевую воду.
- В краткосрочных экспериментах (<10 дней) доксициклин вводят с питьевой водой по следующему протоколу.
- Растворите 5 г сахарозы в 100 мл водопроводной воды. Автоклав.
- Растворите 100 мг доксициклин-гиклата в 5 мл раствора сахарозы (шаг 1.1.1) в конической пробирке объемом 15 мл.
- С помощью шприца объемом 10 мл стерильно отфильтровать раствор через фильтр 0,2 мкм. Добавьте в раствор сахарозы, приготовленный на шаге 1.1.1.
- Подайте мышке раствор доксициклина-сахарозы в качестве питьевой воды. Проверяйте ежедневно и заменяйте, когда раствор становится мутным, что указывает на чрезмерный рост бактерий (замените прозрачный раствор не позднее чем через три дня).