Трансформация генов на основе бинарного бактериального искусственного хромосомного вектора у растений арабидопсиса: метод получения трансгенных растений с вкраплением одной копии

Abstract

Источник: Tark-Dame, M., et al. Генерация трансгенных растений с вставками одной копии с использованием бинарного вектора BIBAC-GW. J. Vis. Exp. (2018).

В этом видео мы демонстрируем генерацию трансгенных растений Arabidopsis, экспрессирующих стабильный трансген через трансформацию генов на основе искусственной хромосомы Agrobacterium-опосредованных.

Protocol

1. Арабидопсис (Arabidopsis) Преобразование

1. Подготовьте растения Arabidopsis к преображению.
   1. Выращивайте растения Arabidopsis в теплице или камере выращивания с контролируемым климатом до тех пор, пока они не зацветут (12 горшков по 9 растений в каждом).
   2. Обрежьте первые болты, чтобы образовалось больше второстепенных болтов. Растения готовы к погружению через 4–6 дней после обрезки, когда у растений много незрелых цветочных головок и мало удобренных силиков.
2. Цветочное окунание
   1. Обмакните соцветия на 5–10 секунд в суспензию агробактерий, несущую Т....

Results

Рисунок 1: Лоток, заполненный рассадой арабидопсиса до и после обработки глюфосинатом-аммонием. Проростки, не экспрессирующие ген bar, который присутствует в T-ДНК PBIBAC-BAR-GW, погибают после опрыскивания раствором глюфосината-аммония. На фотографиях показан один и тот же лоток с рассадой (А) перед опрыскиванием Глюфосинатом-аммонием, через 14 дней после посева, и (В) через 10 дней, после .......

Materials

List of materials used in this article

Name	Company	Catalog Number	Comments
Моногидрат сульфата канамицина	Дючефа	К0126
Gateway LR смесь ферментов клоназы	Thermo Scientific - Инвитроген	11791-019
Мурасиге Скуг средний	Дючефа	М0221
агар	БД	No 214010
Глюфосинат-аммоний (Баста)	Байер	79391781
Люминофорный имиджер	GE Здравоохранение Медико-биологические науки	Тайфун FLA 7000
пищевая пленка (Saran wrap)	Омнилабо	1090681
агароза	Thermo Scientific - Инвитроген	16500