Микрофлюидный капиллярный электрофорез для определения размера фрагментов продуктов ПЦР: метод электрофоретического разделения на основе микрочипов для разделения фрагментов ДНК в зависимости от размера

Abstract

Источник: Wang, H., Zhu et al. Надежный полимеразный цепной анализ для количественного определения тринуклеотидных повторов цитозина-гуанина-гуанина в хрупком гене X с умственной отсталостью-1. J. Vis. Exp. (2019).

Это видео описывает технику микрофлюидного капиллярного электрофореза для разделения ампликонов ПЦР в зависимости от их размера. Этот метод помогает в определении размеров фрагментов с помощью флуоресцентных красителей и стандартных маркеров молекулярного размера.

Protocol

1. Определение размеров фрагментов ПЦР-продуктов

1. Перед началом работы дайте концентрату ДНК-красителя, гелевой матриксу ДНК, маркеру ДНК, лестнице ДНК и очищенным образцам ДНК уравновеситься до комнатной температуры в течение 30 минут.
2. Настройка станции заливки
   1. Замените шприц (см. Таблицу материалов) при использовании новой партии реагентов.
   2. Отрегулируйте опорную пластину, отпустите рычаг зажима шприца и сдвиньте его вверх в верхнее положение.
3. Запустите программное обеспечение для определения размеров (см. Таблицу материалов) и приго....

Materials

List of materials used in this article

Name	Company	Catalog Number	Comments
Прибор для биоанализатора Agilent 2100: 0,2 мл ПЦР-пробирки	Аксиген	ПЦР-02D-C
Биоанализатор Agilent 2100: 1x TE буфер, pH 8,0, без рназы	Амбион	АМ9849
Прибор для биоанализатора Agilent 2100: Прибор для биоанализатора 2100	Agilent	G2939AA
Биоанализатор Agilent 2100: 96-луночный ПЦР-планшет	Термо Фишер	АВ0800
Прибор для биоанализатора Agilent 2100: картридж с электродами	Agilent		Комплектация оборудованием прибора «Биоанализатор 2100
Прибор для биоанализатора Agilent 2100: вихревой смеситель IKA	Agilent		Комплектация оборудованием прибора «Биоанализатор 2100
Прибор для биоанализатора Agilent 2100: Программное обеспечение для определения размеров 2100 Программное обеспечение Expert	Agilent		Комплектация оборудованием прибора «Биоанализатор 2100
Биоанализатор Agilent 2100: Тестовые чипы	Agilent		Комплектация оборудованием прибора «Биоанализатор 2100
Комплект Agilent DNA 7500	Agilent	5067-1506	Для определения размера фрагмента
Набор Agilent DNA 7500: DNA 7500 Ladder (желтый колпачок)	Agilent		В наборе: набор Agilent DNA 7500 (каталожный номер: 5067-1506)
Набор Agilent DNA 7500: Маркеры DNA 7500 (зеленый колпачок)	Agilent		В наборе: набор Agilent DNA 7500 (каталожный номер: 5067-1506)
Набор Agilent DNA 7500: ДНК-чипы	Agilent		В наборе: набор Agilent DNA 7500 (каталожный номер: 5067-1506)
Набор Agilent DNA 7500: концентрат красителя DNA (синяя крышка)	Agilent		В наборе: набор Agilent DNA 7500 (каталожный номер: 5067-1506)
Agilent DNA 7500 kit: Флакон с гелевой матрицей ДНК (красный колпачок)	Agilent		В наборе: набор Agilent DNA 7500 (каталожный номер: 5067-1506)
Набор Agilent DNA 7500: Очиститель электродов	Agilent		В наборе: набор Agilent DNA 7500 (каталожный номер: 5067-1506)
Комплект Agilent DNA 7500: Спиновой фильтр	Agilent		Поставки набора Agilent DNA 7500 (каталожный номер: 5067-1506)
Agilent DNA 7500 kit: Шприц	Agilent		Поставки набора Agilent DNA 7500 (каталожный номер: 5067-1506)
Станция грунтовки стружки	Agilent	5065-4401 (Английский)	Комплектация оборудованием прибора «Биоанализатор 2100
Вакуумный коллектор с фильтровальной пластиной: Вакуумный коллектор MultiScreenHTS	Мерк Миллипор	MSVMHTS00	Вакуумный прибор для фильтрующей пластины Вакуумный коллектор для очистки продуктов ПЦР
Вакуумный коллектор фильтровальной пластины: силиконовая пробка	Мерк Миллипор	XX2004718	Вакуумный коллектор с фильтровальной пластиной
Вакуумный коллектор с фильтровальной пластиной: Вакуумный насос	Мерк Миллипор	WP6122050	Вакуумный коллектор с фильтровальной пластиной
Вакуумный коллектор с фильтровальной пластиной: Емкость для сбора отходов	Мерк Миллипор	XX1004705	Вакуумный коллектор с фильтровальной пластиной