Для просмотра этого контента требуется подписка на JoVE. Войдите или начните свой бесплатный пробный период.

Методическая статья

Анализ жизнеспособности люциферазы на основе АТФ: однородный метод оценки ингибиторного потенциала тест-агентов на опухолевых органоидах

1.7K просмотров

⸱

8 июля 2025 г.

В этой статье

Аннотация

Источник: Higa, A. et al. Высокопроизводительный анализ in vitro с использованием органоидов опухолей, полученных от пациента. J. Vis. Exp. (2021)

В этом видео мы демонстрируем быстрый анализ с однократным добавлением для оценки жизнеспособности клеток в органоидах, полученных от пациента, после обработки тест-агентом, использующим внутриклеточные уровни АТФ в качестве маркера клеточной метаболической активности. Внутриклеточные уровни АТФ измеряют с помощью реакции люцифераза/люциферин, где интенсивность излучаемого света указывает на жизнеспособность клеток и, в свою очередь, на активность тестируемого агента по ингибированию роста.

Протокол

1. Высокопроизводительный скрининг ингибирования роста (HTS)

ПРИМЕЧАНИЕ: Ингибиторная активность роста противоопухолевых агентов против опухолевых органоидов (PDO) пациента оценивается путем измерения внутриклеточного содержания АТФ, как показано на рисунке 1. Этот этап выполняется с использованием коммерчески доступного набора для анализа жизнеспособности клеток (см. Таблицу материалов).

  1. В день 0 культивируйте PDO (например, RLUN007) в колбах до тех пор, пока не будет доступно достаточное количество клеточных кластеров для анализа. За сутки до посева перенесите суспензию PDO из....

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Результаты

figure-results-1
Рисунок 1: Краткое описание протокола, использованного для создания высокопроизводительной системы анализа с использованием 384-луночных микропланшетов.

....

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Раскрытие информации

Конфликт интересов не декларируется.

Материалы

Список материалов, использованных в этой статье
ИмяКомпанияКаталожный номерКомментарии
384-луночный сфероидный микропланшет со сверхнизким креплениемКорнинг4516Пластины для HTS
Среда для наращивания раковых клеток плюсFujifilm Wako Pure Chemical032-25745 (АнглийскийСреда для F-PDO
СеллПет ФТJTEC- TОборудование для фрагментации и диспергирования клеток
CellTiter-Glo 3D анализ жизнеспособности клетокКомпания PromegaГ9683Люминесцентный анализ жизнеспособности клеток, реагент для измерения внутриклеточной АТФ
Эхо 555Лабцит- TМанипулятор для работы с жидкостями
ЭнСпайрПеркинЭлмер- TСчитыватель пластин
Программное обеспечение Morphit, версия 6.0Консалтинговая компания по периферийному программному обеспечениюПрограммное обеспечение для анализа биологических данных
Многоточечный комбиThermoFisher Scientific5840300 (АнглийскийДозатор клеточной суспензии
RLUN007Fujifilm Wako Pure Chemical или Summit Pharmaceuticals InternationalF-PDO от опухоли легких
Сверхнизкая насадка 75 см² колбаКорнингNo 3814Колба для культур для PDO
) )

Больше статей

Люциферазный анализ на основе АТФжизнеспособность органоидов опухолиизмерение внутриклеточного АТФреакция люциферазы и люциферинадетекция биолюминесценциискрининг исследуемых агентовмикропланшет с гидрогелевым покрытиемэкстракция путем лизиса клетокстабилизация ингибитором АТФазыизмерение светового сигнала на люминометре