Методическая статья

Биорепортерный анализ: чувствительный метод с использованием биолюминесцентной репортерной системы для обнаружения антител к SARS-CoV-2

8 июля 2025 г.

В этой статье

Аннотация

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Источник: Rezaei, R. et al., Обнаружение антител к рецептор-связывающему домену SARS-CoV-2 с помощью биорепортера на основе HiBiT. J. Vis. Exp. (2021)

В этом видео мы показываем анализ на основе системы биорепортеров HiBit-RBD для обнаружения нейтрализующих антител к SARS-CoV-2. Эта система нацелена на вирусный домен RBD с помощью биолюминесцентной репортерной системы, содержащей HiBiT, слитый с доменом RBD.

Протокол

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

1. Обнаружение антител против RBD с помощью быстрого и чувствительного анализа

  1. Анализ на антитела HiBiT-RBD
    1. Подготовьте биорепортер HiBiT-RBD.
      заметка: Рекомендуется использовать надосадочную жидкость для следующего анализа, так как она проще в сборе и содержит зрелую гликозилированную версию белка. Кроме того, лизат содержит несколько других белков, которые могут препятствовать взаимодействию HiBiT-RBD-антител.
    2. Соедините 50 мкл HiBiT-RBD-содержащего надосадочной жидкости с 1 мкг коммерческого антитела к SARS-CoV-2-RBD в микропробирке объемом 1,5 мл. Добавьте в раствор 20 мкл иммуноглобулин-связывающего белка (белка G). Доведите общий объем до 300 μл, добавив PBS.
      заметка: Общий объем смеси может быть уменьшен до 150 μл. Меньшие общие объемы не рекомендуются, так как это может привести к недостаточному смешиванию антител с биорепортером.
    3. Инкубируйте пробирку (пробирки) в вибростенде или ротаторе в течение 30 мин. Центрифуга при 12 000 x g в течение 30 с, выбросьте надосадочную жидкость и промойте PBS. Повторите процесс три раза, чтобы удалить свободный HiBiT-RBD. Повторно суспендируйте в 50 мкл PBS и переложите в 96-луночный планшет.
    4. Добавьте 50 μL 1x LgBiT и подождите 5 минут. Затем добавьте 50 μL 1x подложки NanoLuc. Сразу же считайте люминесцентный сигнал с помощью люминометра.

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Раскрытие информации

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
Конфликт интересов не декларируется.

Материалы

Список материалов, использованных в этой статье
ИмяКомпанияКаталожный номерКомментарии
Ручная магнитная шайба Bio-PlexБио-Рад171020100устройство
Система двойного анализа Glo люциферазыКомпания PromegaЕ2940Набор 100 мл
ЛгБиТКомпания PromegaН3030Набор для пробирных анализов
Магнитные бусины Pierce Protein GThermo Fisher Scientific88848проба
SARS-CoV-2 (2019-nCoV) Spike нейтрализующее антитело, мышиный мабСиноБиология40592-ММ57проба
Считыватель микропланшетов Synergy MxБиоТек96-луночный планшетный считыватель люминометра

Перепечатки и разрешения

Запросить разрешение на повторное использование текста или иллюстраций этой статьи JoVE

Запросить разрешение

Теги

HiBiT RBDRBDbeads GLgBiT

Похожие статьи