Анализ фагоцитоза: метод иммуноокрашивания для визуализации поглощения апоптотических клеток в эмбриональных клетках Drosophila melanogaster

Аннотация

Источник: Нонака, С. и др. Анализ фагоцитоза для апоптотических клеток в эмбрионах дрозофилы. J. Vis. Exp. (2017).

Это видео демонстрирует технику иммуноокрашивания для визуализации поглощения апоптотических клеток в гомогенизированных эмбриональных клетках Drosophila melanogaster. Этот метод дает представление о клеточной физиологии путем определения степени поглощения апоптотических клеток.

Протокол

Все процедуры, связанные с животными, были проверены местным институциональным комитетом по уходу за животными и ветеринарным наблюдательным советом JoVE.

1. Окрашивание гемоцитов

1. Иммуноокрашивание антителом к крокеморту
   1. Стеклянные предметные стекла последовательно замочить в метаноле на 10 мин, в PBS, содержащем 0,2% (v/v) Triton X-100 на 10 мин, а затем в PBS на 10 мин.
   2. Поместите 20 мкл 5% (v/v) цельной сыворотки свиней в PBS, содержащую 0,2% (v/v) Triton X-100, на клетки для блокирования. Инкубировать предметные стекла при комнатной температуре в течение 20 минут.
   3. Удалите раствор со стекол и ....

Материалы

Список материалов, использованных в этой статье

Имя	Компания	Каталожный номер	Комментарии
Цельная сыворотка для свиней	MP Biomedicals	No 55993	Для блокировки
Kpl Anti-Rat IgG (H+L) Ab MSA, AP	КПЛ	475-1612	вторичное антитело к окрашиванию гемоцитов антителом анти-Крокеморта
5-бром-4-хлор-3-индолилфосфат	Рош	11383221001	BCIP, Для окрашивания гемоцитов
Нитро синий тетразолиум	Рош	11383213001	NBT, Для окрашивания гемоцитов
Антитела против Крокеморта			описан ранее в Manaka et al., J. Biol. Chem., 279, 48466-48476
Набор для обнаружения апоптоза Apop Tag in situ	Многородность	С7100	Для окрашивания апоптоитных клеток. Этот набор включает в себя буфер для уравновешивания, буфер для реакции, буфер STOP/Wash, фермент TdT и анти-дигоксигенин-пероксидазу.
3,3'-диаминобензидина тетрагидрихлорид	Накалай Теске	11009-41	DAB, Для окрашивания апоптоитных клеток

гг.