Анализ люциферазы для изучения эффективности противопаразитарных химических веществ против паразитов

Аннотация

Источник: Key, M., et al. Определение эффективности химического ингибитора против внутриклеточного роста токсоплазмы Gondii с использованием анализа роста на основе люциферазы. J. Vis. Exp. (2020).

Видео демонстрирует анализ люциферазы, используемый для определения эффективности антипаразитарного химического ингибитора против внутриклеточного патогена Toxoplasma gondii. В исследовании участвуют паразиты, экспрессирующие люциферазу, вторгающиеся в клетки-хозяева для репликации и выживания. Химический ингибитор связывается с цистеиновыми протеазами паразита и подавляет репликацию. Обнаруженная активность люциферазы пропорциональна кратным изменениям в росте паразита, определяя эффективность препарата против паразита.

Протокол

Все процедуры, связанные с животными, были проверены местным институциональным комитетом по уходу за животными и ветеринарным наблюдательным советом JoVE.

1. Оценка эффективности ингибирования химических соединений против роста токсоплазмы

ПРИМЕЧАНИЕ: Здесь в качестве примера представлена оценка ингибирования LHVS в росте токсоплазмы. Было протестировано восемь различных концентраций LHVS, и для каждой из трех биологических реплик были проведены три технические репликации для штаммов RHΔku80::NLuc и RHΔku80Δcpl::NLuc.

1. Пер....

Результаты

Рисунок 1: Оценка эффективности ингибирования LHVS и пириметамина с использованием анализа роста на основе люциферазы. Паразитов инокулировали в 96-луночный микропланшет в течение 4 ч, чтобы обеспечить инвазию в клетки-хозяева. Неинвазированных паразитов смывали, а планшет заполняли средой, содержащей различные концентрации LHVS или пириметамина, и инкубировали еще 96 ч до определения активности .......

Материалы

Список материалов, использованных в этой статье

Имя	Компания	Каталожный номер	Комментарии
Biotek Synergy H1 Гибридный многорежимный считыватель микропланшетов	Инструменты BioTek
Коэлентеразин н	Prolume	301-10 гЧТЗ
программное обеспечение
Программное обеспечение GraphPad Prism (8-я версия)