Анализ кальциноза для измерения концентрации кальция в интерстициальных клетках аортального клапана

Аннотация

Источник: Bouchareb, R. et al., Изоляция клеток интерстициального клапана мыши для изучения кальцификации аортального клапана in vitro.J. Vis. Exp. (2021).

Это видео демонстрирует метод анализа для оценки кальцификации интерстициальных клеток аортального клапана in vitro. Анализ помогает количественно определить концентрацию кальция с помощью реагента arsenazo III, чувствительного к кальцию красителя, который реагирует с ионами кальция с образованием кальциево-арсеназового комплекса фиолетового цвета.

Протокол

Все описанные здесь процедуры на животных были одобрены Медицинской школой Икана в Маунт-Синай, институциональным ядром и комитетом по использованию.

1. Подготовка перед выделением клапанных клеток от взрослых мышей

1. Очистите и стерилизуйте все хирургические инструменты, показанные на рисунке 1A, используя 70% v/v этанола, а затем автоклавируйте их в течение 30 мин. Очистите хирургическое рабочее место 70% этанолом.
2. Добавьте 500 мкл пенициллин-стрептомицина к 50 мл 10 мм HEPES. Приготовьте аликвоту из 50 мл 1x фосфатно-солевого буфера (PBS). Держите растворы на льду.
3. Приготовьте раство....

Результаты

Рисунок 1: Описание расслоения клапана. (А) Репрезентативное изображение всех хирургических инструментов, необходимых для вскрытия, ножницы 2 необходимы для вскрытия кожи мыши и ножницы 3 для вскрытия грудной клетки. Пинцет 5 и 6 нужен для удержания кожи и раскрытия грудной клетки. (Б) Оставьте 3 мм ткани от аорты (черная стрелка). (В) Разрежьте серд.......

Материалы

Список материалов, использованных в этой статье

Имя	Компания	Каталожный номер	Комментарии
Ножницы с режущей кромкой 3 мм	Ф.С.Т	15000-00
Набор реагентов Арсеназо-III	НАУЧНАЯ ТОЧКА	С7529-500	Набор для измерения концентрации кальция
Боннские ножницы	Ф.С.Т	14184-09
гидроокись кальция	СИГМА-Олдрич	No 31219
Коллагеназа I типа (125 ЕД/мг)	Thermofisher Scientific	17018029
DMEM	Ттермофишер	11965092
Щипцы Extra fine graefe	Ф.С.Т	11150-10
ФБС	Gibco	16000044
Тонкие щипцы	Ф.С.Т. Дюмон
список совместимого оборудования	СИГМА-ОЛДРИЧ	Н1758
Решение HEPES 1 M	ТЕХНОЛОГИИ СТВОЛОВЫХ КЛЕТОК
L-глютамин 100x	Thermofisher Scientific	A2916801
PBS 10x	СИГМА-ОЛДРИЧ
Пенициллин стрептомицин 100х	Thermofisher Scientific	10378016
Пируват натрия 100 мМ	Thermofisher Scientific	11360070
Щипцы стандартной формы	Ф.С.Т	11000-12
Хирургические ножницы - острые-тупые	Ф.С.Т	14008-14
Трипсин 0,05%	Thermofisher Scientific	25300054