Анализ поглощения радиоактивных аминокислот для количественной оценки клеточного поглощения аминокислот

Аннотация

Источник: Shen, L., et al. Оценка потребления аминокислот в культивируемых костных клетках и изолированных костных стержнях. J. Vis. Exp. (2022).

Это видео демонстрирует метод in vitro для оценки поглощения аминокислот стромальными клетками, полученными из костного мозга. Na⁺-зависимые переносчики аминокислот опосредуют поглощение меченых радиоактивными аминокислотами внутри клеток, а поглощение клетками оценивается путем измерения радиоактивности.

Протокол

Использование радиоактивных материалов (RAM) требует предварительного одобрения назначенного комитета по безопасности в каждом учреждении.

1. Поглощение аминокислот клетками

1. Планшет 5 x 10^{по 4} клетки ST2 в каждой лунке 12-луночного планшета для культуры тканей. Пластинчатые клетки в α-MEM, содержащие 10% FBS, 100 Ед/мл пенициллина и 0,1 мкг/мл стрептомицина (Pen/Strep). Нанесите дополнительные лунки клеток для количественного определения количества клеток для каждого условия нормализации на шаге 1.12. Инкубируйте клетки в увлажнённом инкубаторе для клеточных культур при 37 °C с 5%_CO2.
2. Культивируйте....

Материалы

Список материалов, использованных в этой статье

Имя	Компания	Каталожный номер	Комментарии
0,25% трипсина	Gibco	No 25200
12-луночный планшет	Корнинг	No 3513
Счетчик сцинтилляций Beckman LS6500
Хлорид кальция	сигма	С1016
холина хлорид	сигма	С7077
D-(+)-раствор глюкозы	сигма	Г8769
ДПБС	Gibco	14190
HEPES(1М)	Gibco	No 15630
L-[3,4-3H(N)]-глютамин	ПеркинЭлмер	NET551250UC
Жидкие флаконы для сцинтилирования	сигма	Z190535
раствор хлорида лития, 8М	сигма	Л7026
Хлорид магния	сигма	М8266
MEMα	Gibco	12561
Микроцентрифужная пробирка, 15 мл	Биотикс	89511-256
Хлористый калий	сигма	П3911
Бикарбонат натрия	сигма	С6014
хлорид натрия	сигма	С9888
Додецилсульфат натрия	сигма	436143
Ultima Gold (Сцинтилляционный раствор)	ПеркинЭлмер	6013329
α-(метиламино)изомасляная кислота	сигма	М2383