Для просмотра этого контента требуется подписка на JoVE. Войдите или начните свой бесплатный пробный период.

Методическая статья

Люминесцентный анализ для оценки нейротоксичности тестируемых соединений на нейроны

831 просмотров

8 июля 2025 г.

В этой статье

Аннотация

Источник: Wahlestedt, C., et al., A Neurite Outgrowth Analysis and Neurotoxicity Assessment with Human Neural Progenitor Cell-Derived Neurons. J. Vis. Exp. (2020)

В этом видео мы описываем основанный на люминесценции метод оценки нейротоксичности низкомолекулярных соединений, способствующих росту нейритов, на жизнеспособность нейронов, полученных из hNPC. Анализ измеряет внутриклеточный уровень АТФ, индикатор жизнеспособности клеток, для оценки нейротоксичности после обработки исследуемым соединением.

Протокол

Все процедуры с участием людей были выполнены в соответствии с институциональными, национальными и международными рекомендациями по благополучию человека и были проверены местным институциональным наблюдательным советом

1. Выделение и культивирование нейронных клеток-предшественников человека (hNPCs)

  1. Поместите мозговую ткань в чашку Петри диаметром 100 мм и осторожно удалите мозговые оболочки с помощью щипцов.
  2. Перенесите мозговую ткань в коническую трубку объемом 50 мл и дважды промойте ее 20 мл PBS, аккуратно перевернув трубку.
  3. Инкубируйте мозговую ткань в новой конической трубке объемом 50 мл, погрузив тка....

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Раскрытие информации

Конфликт интересов не декларируется.

Материалы

Список материалов, использованных в этой статье
ИмяКомпанияКаталожный номерКомментарии
Антибиотик-антимикотикGibco15240062
В27термо17504001
В27 - минус витамин Атермо12587010
БДНФПепроТех450-02
БСАсигмаА8531
CellTiter-GloКомпания PromegaГ7572
Система CoolCellКорнингNo 432000Контейнеры для заморозки ячеек обеспечивают стандартизированную контролируемую скорость заморозки до -1°C/мин в морозильной камере при температуре -80°C
КриоСтор CS10Технологии стволовых клеток7930Среда для криоконсервации, содержащая 10% ДМСО
DMEM/F12Gibco11320033
Дмсосигма34869-100МЛ
ЭФРGibcoPHG0311
ФГФGibcoPHG6015
ГДНФПепроТех450-10
ГлутамаксGibco35050061Добавка L-аланила-L-глютамина
ГепаринКальбиохим375095
ЛамининсигмаЛ2020-1МГ
L-аскорбиновая кислотасигмаА92902-25Г
mFreSRТехнологии стволовых клеток5854Бессывороточная криоконсервирующая среда, предназначенная для криоконсервации эмбриональных и индуцированных плюрипотентных стволовых клеток человека
N2Gibco17502048
Nunc 384-луночный полистирольный белый микропланшеттермо164610
ПБСтермо10010-049 (Английский)
Поли-L-лизинсигмаП5899-5МГ
СтемПро АккутазаGibcoA1110501Реагент для диссоциации клеток, содержащий протеолитические и коллагенолитические ферменты
Нейробазальная средаGibco21103049

Теги

Люминесцентный анализоценка нейротоксичностирост нейритовнейральные стволовые клетки человекаизмерение уровня АТФанализ жизнеспособности клетокмикропланшетный ридерпокрытие поли-L-лизиномпокрытие ламининомдифференцировочная среда