Северный блот для обнаружения и количественного определения специфической микроРНК в экстракте общей РНК растительной ткани

Аннотация

Источник: Tirumalai, V., et al. Анализ РНК-блотов для обнаружения и количественной оценки растительных микроРНК. J. Vis. Exp. (2020)

В этом видео мы демонстрируем северный блот, метод гибридизации для обнаружения и количественного определения микроРНК (микроРНК) из общего количества РНК, извлеченных из растительных тканей.

Протокол

1. Гель-электрофорез

1. Остановите предварительный запуск и промойте лунки перед загрузкой проб.
2. Нагрейте образцы при температуре 98 °C в течение 1 минуты и загрузите образцы горячими в лунку с помощью капиллярных наконечников. Вставьте наконечник на дно лунки так, чтобы проба занимала в лунке один тонкий слой.
3. Полная загрузка всех образцов. Включите загрузку маркера десятилетия РНК.
4. Запустите гель при напряжении 80 В до тех пор, пока бромофенольный синий краситель не закончится почти полностью. Бромфеноловый синий работает при 10.н. в 15% денатурирующем акриламидном геле.

2. Подготовка к электро....

Материалы

Список материалов, использованных в этой статье

Имя	Компания	Каталожный номер	Комментарии
40% раствор акриламида-бисакриламида	сигма	А9926	химический
Персульфат аммония (APS)	БиоРад	1610700 (Английский	химический
промокательная бумага	Ватман промокательная бумага I	1001-125	проба
Бромфенол синий	сигма	Б5525-5Г	химический
Советы по нагрузке на капилляры	БиоРад	2239915	Пластиковая посуда
Деионизированный формамид	Амбион	АМ9342	химический
Нагревательный блок	Эппендорф	5350	устройство
Мембрана Hybond N+нейлоновая	GE	RPN203B	проба
Бутылка для гибридизации	сигма	Z374792-1 шт.	Пластиковая посуда
Печь для гибридизации	Термо Сайентиал	1211В79	устройство
N,N,N',N'-Тетраметилэтилендиамин (TEMED)	сигма	Т7024-25мл	химический
ЛюминофорИмиджер	Сканер GE-Typhoon	29187194	устройство
Экран и кассета PhosphorImager	GE Healthcare	ГЭ28-9564-75	устройство
Пипетки	Gilson, модели: P20 и P10	FA10002M, FA10003M	Пластиковая посуда
Пластиковая пипетка	сокол	No 357550 (Английский	Пластиковая посуда
Аппарат из полиакриламидного геля	БиоРад	1658003EDU	устройство
Колонка Sephadex G-25	GE Healthcare	27532501	устройство
Концентратор Speed Vac	Термо Сайентиал	Тел.: 20-548-130	устройство
Спинвин	Тарсонс	1010	устройство
Т4 полинуклеотидкиназа (PNK)	клюв	М0201С	проба
Трансблот-аппарат	БиоРад	1703946	устройство
Буфер для гибридизации ULTRAHyb	Амбион	АМ8670	проба
мочевина	Научный Фишер	15985	химический
УФ-сшиватель	УВП	КЛ-1000Л	устройство
вихрь	Тарсонс	3020	устройство
Водяная баня	НЕОЛАБ	Д-8810	устройство
Ксилолцианол	сигма	Х4126-10Г	проба

) )