Технология биослойной интерферометрии для обнаружения взаимодействий между лигандом и аналитом

Abstract

Источник: Desai, M., et al. Применение биослойной интерферометрии (BLI) для изучения белок-белковых взаимодействий в транскрипции. J. Vis. Exp. (2019)

В этом видео мы демонстрируем технологию биослойной интерферометрии (BLI) для обнаружения межмолекулярных взаимодействий между лигандами и целевыми аналитами в режиме реального времени. BLI измеряет изменения интерференционной картины белого света, отраженного от слоя иммобилизованных лигандов на поверхности биосенсора при их взаимодействии с аналитами в растворе.

Protocol

1. Гидратация биосенсора и настройка анализа

1. Включите аппарат BLItz.
2. Убедитесь, что аппарат подключен к компьютеру через USB-порт вывода данных на задней панели аппарата.
3. На компьютере откройте соответствующее программное обеспечение (например, BLItz Pro) и нажмите «Расширенная кинетика» в левой части экрана.
4. В программном обеспечении введите всю необходимую информацию об эксперименте (включая название эксперимента, описание, идентификатор образца и концентрацию белка) под каждым соответствующим заголовком.
5. Нажмите «Тип биосенсора» и выберите Ni-NTA в раскрывающемся ....

Materials

List of materials used in this article

Name	Company	Catalog Number	Comments
Машина BLItz	ФортеБио	45-5000	устройство
Лоток для биосенсора Ni-NTA	ФортеБио	18-5101	Готовые к использованию биосенсоры Ni-NTA для белков с поли-His-мечкой
Держатель для сбросов	ФортеБио	45-5004	устройство
ПЦР-пробирки (0,2 мл)	Томас Сайенти	CLS6571	Пластиковая посуда
Микроцентрифужные пробирки (черные)	Thermo Fisher Scientific	Тел.: 03-391-166	Пластиковая посуда
Кимвайпс	Thermo Fisher Scientific	06-666А	Пластиковая посуда
ДТТ	Thermo Fisher Scientific	Р0861	химический
Эдта	МиллипорСигма	Е6758	химический
MgCl2	МиллипорСигма	М8266	химический
NaCl	МиллипорСигма	С9888	химический
Трис-HCl	ГолдБио	T095100	буфер