Для просмотра этого контента требуется подписка на JoVE. Войдите или начните свой бесплатный пробный период.
Методическая статья
1.7K просмотров
⸱
8 июля 2025 г.
Источник: Майер, И. Разработка противовирусных агентов с помощью поверхностного плазмонного резонанса. J. Vis. Exp. (2022)
Это видео описывает метод поверхностного плазмонного резонанса, или SPR, для изучения взаимодействия между двумя молекулами с помощью сенсорного чипа. Изменение угла резонанса и интенсивности отраженного света обнаруживается как функция ассоциации и диссоциации двух молекул, что дает информацию о взаимодействиях между двумя молекулами.
Для настоящего исследования гибридный белок CVN-малый убиквитин-подобный модификатор (SUMO) был использован в иммуноферментных анализах вместо CV-N и подходит для клеточных анализов. Рекомбинантный полноразмерный белок HA H3 вируса гриппа А получают коммерчески (см. Таблицу материалов) или экспрессируют в клеточных линиях HEK293 млекопитающих и клетках насекомых, инфицированных бакуловирусом, в соответствии со стандартными протоколами. Уханьский спайковый белок 1 экспрессируется в клетках HEK293 млекопитающих. Синтез мон-маннозилированного пептида (ММ) и ди-маннозилированного пептида (ДМ) позволяет обнаруживать гомогенные лиганды к CVN2 и мономаннозил....
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Рисунок 1: Последовательности CV-N и экспрессия. (A) CVN2 без линкера между каждым CV-N-повтором (101 аминокислота каждый) и четырьмя дисульфидными мостиками экспрессируются в векторе pET11a в E. кишечная палочка. (B) Экспрессия двух независимых колоний для CV-N (мономер) и CVN2 (димер). (C) Варианты дисульфидных связей очищаются и .......
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
| Имя | Компания | Каталожный номер | Комментарии |
|---|---|---|---|
| Äkta primeplus | Цитива | ||
| Трубки Amicon | Мерк | С7715 | |
| Ампиллицин | Сигма-Олдрич | А5354 | |
| Сошниковый охладитель Beckmann Allegra X-30R центрифуга | Бекман Коултер | В06320 | |
| Разбрасыватель ячеек | Сигма-Олдрич | HS86655 | Серебристая нержавеющая сталь, стержень L 33 мм |
| Пользовательские олигос ДНК | Сигма-Олдрич | ОЛИГО | |
| Пользовательский Gensynthesis | GenScript | #1390661 | Вектор клонирования: pET27b(+) |
| Буфер Cytiva HBS-EP+ 10, 4x50 мл | Термо Сайентиал | Тел.: 50-105-5354 | |
| Дионекс УлитМат 3000 | Термо Сайентиал | IQLAAAGABHFAPBMBBB | |
| Фермент рестрикции Dpn I (10 Ед/мкл) | Научный центр Фишера | ЭР1701 | |
| ДТТ | Мерк | ДТТ-РО | |
| EDC | Мерк | No 39391 | |
| Эдта | Мерк | Е9884 | |
| Трубки Eppendorf Safe-Lock | Эппендорф | 30120086 | |
| Трубки Eppendorf Safe-Lock | Эппендорф | 30120094 | |
| Персональные микроцентрифуги Eppendorf Minispin и MiniSpin Plus | Сигма-Олдрич | Z606235 | |
| этанол | Мерк | 51976 | |
| Этаноламин гидрохлорид | Мерк | Е6133 | |
| Falcon 50mL Конические центрифужные пробирки | Научный центр Фишера | Телефонный номер 14-432-22 | |
| Falcon 14 мл Пробирка из полистирола с круглым дном, с защелкивающейся крышкой, стерильная, 25/Упаковка | Корнинг | 352057 | |
| глюкоза | Мерк | Г8270 | |
| Глицин гидрохлорид | Мерк | No 55097 | |
| Белок H3 гиалуроновой | Абкам | АБ69751 | |
| ХЕПЕС | Мерк | Н3375 | |
| Гис-селект Ni2+ | Мерк | Н0537 | |
| Имидазол | Мерк | И2399 | |
| ИПТГ | Мерк | И6758 | |
| Канамицин А | Сигма-Олдрич | К1377 | |
| Кромасил 300-5-С4 | Нурьон | ||
| ЛБ агар | Мерк | 52062 | |
| ЛБ агар | Мерк | 19344 | |
| Л.Б. Леннокс | Мерк | Л3022 | |
| лизоцим | Мерк | 10837059001 | |
| Хлорид магния | Мерк | М8266 | |
| Сульфат магния | Мерк | М7506 | |
| НаН2П04 | Мерк | С0751 | |
| Спектрофотометр NanoDrop UV-Vis2000c | Термо Сайентиал | ND2000CLAPTOP | |
| НаОХ | Мерк | С5881 | |
| Национальная служба здравоохранения (NHS) | Мерк | 130672 | |
| Новозеландский амин (гидролизат казеина) | Мерк | С0626 | |
| ПБС | Мерк | 806552 | |
| PD MidiTrap G-10 | Сигма-Олдрич | ГЭ28-9180-11 | |
| пептон | Мерк | 70171 | |
| pET11a | Merck Millipore (Новаген) | No 69436 | |
| ПМСФ | Мерк | ПМСФ-РО | |
| QIAprep Набор для мини-подготовки (1000) | Цягэн | 27106С4 | |
| Программный пакет Reichert Autolink1-1-9 | Райхерт | ||
| Двухканальная система Reichert SPR SR7500DC | Райхерт | ||
| Скруббер2-2012-09-04 для анализа данных | Райхерт | ||
| Паспорт безопасности | Мерк | 11667289001 | |
| Набор для сайт-направленного мутагенеза, включая плазмиду для контроля pUC18 | Стратагена | #200518 | |
| Хлористый содь | Мерк | С9888 | |
| Тригидрат ацетата натрия | Мерк | No 236500 | |
| Чип датчика SPR C19RBDHC30M | Биоаналитика XanTec | SCR C19RBDHC30M | |
| Чип датчика SPR CMD500D | Биоаналитика XanTec | SCR CMD500D | |
| Стандартные чашки Петри Sterilin 90 мм | Термо Сайентиал | 101Р20 | |
| ТБС | Мерк | Т5912 | 10x, решение |
| Тритон-Х100 | Мерк | Т8787 | |
| Триптон | Мерк | 93657 | |
| Подросток20 | Мерк | П1379 | |
| Смеситель Vortex-Genie 2 | Мерк | Z258423 | |
| Х-гал | Мерк | ХГАЛ-РО | |
| XL1-Blue Сверхкомпетентные ячейки | Стратагена | #200236 | |
| Дрожжевой экстракт | Мерк | Y1625 |
