Генерация in vitro плазмоцитоидных дендритных клеток из общих лимфоидных предшественников

Аннотация

Источник: Chang, S., et al. Генерация in vitro плазмоцитоидных дендритных клеток мыши из общих лимфоидных предшественников с использованием системы подачи AC-6. J. Vis. Exp. (2015)

Это видео демонстрирует анализ in vitro для получения плазмоцитоидных дендритных клеток (pDCs) из обычных лимфоидных клеток-предшественников (CLP). При совместном культивировании очищенных CLP с γ-облученными фидерными клетками в присутствии Fms-подобной тирозинкиназы-3 лиганда (FL) CLP дифференцируются в неадгезивные pDCs, присутствие которых подтверждается с помощью проточной цитометрии.

Протокол

Все процедуры, связанные с животными, были проверены местным институциональным комитетом по уходу за животными и ветеринарным наблюдательным советом JoVE.

1. Подготовка фидерных ячеек AC-6

Примечание: Линия стромальных клеток AC-6.21 (сокращенно AC-6) (предоставлена И. Вайсманом, Стэнфордский университет) должна поддерживаться в RPMI с добавлением 15% инактивированной при нагревании фетальной бычьей сыворотки (FBS). Чтобы служить в качестве фидерных клеток, клетки AC-6 облучают γ 3000 рад (30 Гр) за день до совместного культивирования для предотвращения их пролиферации. Обратите в....

Материалы

Список материалов, использованных в этой статье

Имя	Компания	Каталожный номер	Комментарии
Антимышиный Ly6g/Ly6c (PE), клон RB6-8C5	Биолегенда	108408	Маркер линии
Антимышь NK1.1 (PE), клон PK136	Биолегенда	108708	Маркер линии
Антимышь CD11b (PE), клонM1/70	Биолегенда	101208	Маркер линии
Антимышиный CD19 (PE), клон eBio1D3	Биолегенда	115508	Маркер линии
Антимышь B220 (PE), клон RA3-6B2	Биолегенда	103208	Маркер линии/FACS
Антимышь CD3 (PE), клон 17A2	Биолегенда	100308	Маркер линии
Антимышь CD8a (PE), клон 53-6.7	Биолегенда	100707	Маркер линии
Антимышиный MHC-II (PE), клон NIMR-4	Биолегенда	107608	Маркер линии
Антимышь Ter119 (PE), клон TER-119	Биолегенда	116208	Маркер линии
Антимышиный Thy1.1 (PE), клон HIS51	eBioscience	Тел.: 12-0900-83	Маркер линии
Антимышиный M-CSFR (APC), клон AFS98	Биолегенда	No 135510	FACS
Антимышиный c-Kit (PerCP/Cy5.5), клон 2B8	Биолегенда	105824	FACS
Антимышь Sca-1 (FITC), клон D7	Биолегенда	108106	FACS
Антимышиный IL-7Ra (PE/Cy7), клон A7R34	Биолегенда	135014	FACS
Антимышь CD11c (PerCP/Cy5.5), клон N418	Биолегенда	117328	FACS
Антимышь CD11b (FITC), клон M1/70	Биолегенда	101206	FACS
FACSAria III	BD Biosciences		Сортировщик клеток
Сортировочная трубка FACS	BD Biosciences	352054
ФлоуДжо	ООО «ФлоуДжо		Программное обеспечение для анализа потока

»