Иммунные системы и их компоненты

В этом видео мы демонстрируем выделение моноцитов из цельной человеческой крови путем иммуномагнитного отрицательного разделения. Выделенные моноциты могут быть использованы для дальнейшего анализа.

В этом видео мы демонстрируем выделение клеток Купфера или макрофагов печени мыши из печени мыши. Печень перфузируется раствором для сбраживания с последующим разделением по градиенту плотности. Выделенные адгезивные клетки Купфера могут быть использованы для дальнейшего анализа.

Это видео демонстрирует протокол без ферментов для выделения макрофагов из ганглия дорсального корешка мыши (DRG) с использованием метода механической диссоциации. После гомогенизации свежесобранной ткани DRG антитела против рецепторов клеточной поверхности на макрофагах используются для флуоресцентного мечения клеток с последующим выполнением проточной цитометрии для подтверждения присутствия макрофагов в образце.

В этом видео мы демонстрируем выделение лимфоцитов из собранного участка мыши Пейера. Выделенные лимфоциты могут быть использованы для дальнейшего анализа.

В этом видео мы демонстрируем выделение мононуклеарных клеток периферической крови, PBMC, содержащих моноциты и лимфоциты, из охристой оболочки человека с помощью центрифугирования с градиентом плотности. Выделенные PBMC могут быть использованы для дальнейшего анализа.

В этом видео мы демонстрируем выделение В-клеток из периферической крови человека с использованием биотинилированных антител, специфичных для не-В-клеток, и стрептавидин-конъюгированных магнитных микрогранул.

В этом видео мы демонстрируем выделение и культивирование стромальных клеток костного мозга из длинных костей мышей. Выделенные адгезивные BMSC могут быть использованы для дальнейшего анализа.

Это видео демонстрирует выделение Т-клеток из мононуклеарных клеток периферической крови (PBMC) с использованием технологии функционализированной сортировки клеток, активируемых плавучестью (BACS). Метод выделения включает в себя положительный отбор CD3+ Т-клеток путем мечения клеток биотинилированными анти-CD3 антителами и разделения связанных с антителами клеток с помощью микропузырьков, связанных со стрептавидином.

В этом видео мы описываем протокол первичной активации Т-клеток человека. Инкубация наивных Т-клеток с магнитными шариками, покрытыми анти-CD3 и анти-CD28 антителами, с последующим лечением интерлейкином-2 или интерлейкином-15, приводит к активации наивных Т-клеток и их дифференцировке и пролиферации в эффекторные Т-клетки или Т-клетки памяти.

В этом видео мы демонстрируем выделение маргинальных лейкоцитов печени из печени мыши путем принудительной перфузии.

Это видео демонстрирует выделение лимфоцитов, включая естественные киллеры или NK-клетки, из ткани печени человека для селективного расширения. Ферментативное и механическое расщепление с последующим разделением градиента плотности способствует выделению лимфоцитов, в том числе NK-клеток. Собранные лимфоциты в дальнейшем могут быть использованы для селективной экспансии NK-клеток.

Это видео демонстрирует технику расширения естественных киллеров (NK) непосредственно из мононуклеарных клеток периферической крови (PBMC) с использованием фидерной клеточной линии. PBMC культивируют совместно с генетически модифицированными лимфообластоидными фидерными клетками, экспрессирующими мембраносвязанный интерлейкин-21 (mIL-21), и в культуру добавляют цитокины интерлейкин-2 (IL-2) и интерлейкин-15 (IL-15). Вместе этот коктейль лигандов приводит к длительной экспансии NK-клеток с...

Это видео демонстрирует процедуру выделения клеток Сертоли из семенных канальцев мыши, компонента яичек. Ферментативное расщепление и повторные промывки способствуют высвобождению клеток Сертоли в раствор, который может быть культивирован в дальнейшем для пролиферации и роста.

Это видео демонстрирует протокол выделения на основе магнитной маркировки популяции CD4+Vδ1+γδ Т-клеток низкой концентрации из мононуклеарных клеток периферической крови человека (PBMC). Используя комбинацию конъюгированных с FITC анти-Vδ1 антител, магнитных микрогранул против FITC и суперпарамагнитных шариков, покрытых анти-CD4 антителами, CD4+Vδ1+ Т-клетки могут быть успешно выделены из популяции PBMC.

В этом видео мы демонстрируем выделение цитотоксических нейтрофилов высокой плотности и нейтрофилов низкой плотности из крови мыши, несущей опухоль, путем прерывистого центрифугирования градиентом сахарозы.

Это видео демонстрирует процедуру выделения сети иммунных клеток десны из мышиной модели. Ферментативное сбраживание высвобождает десневую ткань из прикрепленных зубов и кости, которая в дальнейшем механически переваривается, высвобождая иммунные клетки из десны. Выделенные клетки готовы к проведению иммунологических экспериментов.

Это видео демонстрирует метод перитонеального лаважа для выделения зрелых тучных клеток соединительнотканного типа из брюшинной полости взрослых мышей. После выделения смеси первичных иммунных клеток из брюшной полости проводят селективную пролиферацию тучных клеток в соответствующих условиях культивирования.

В этом видео мы описываем протокол выделения клеток CD11b, включая микроглию, из мозга детенышей мышей с помощью магнитно-активируемой сортировки клеток. Ткани мозга гомогенизируют с получением суспензий одиночных клеток, которые инкубируют с микрогранулами, покрытыми анти-CD11b-антителами, с последующим разделением на магнитной колонке для очистки популяции клеток CD11b+.

Это видео демонстрирует хирургическую процедуру изоляции пахового дренирующего лимфатического узла на мышиной модели. Разрез брюшной области обеспечивает доступ к паховому лимфатическому узлу, который собирается хирургическим путем. Собранный полупрозрачный паховый лимфатический узел может быть использован для иммунологических исследований.

Это видео демонстрирует технику препарирования для забора подколенных дренирующих лимфатических узлов с задних лап мыши. Лимфатические узлы играют решающую роль в формировании врожденного и адаптивного иммунитета, а сбор неповрежденных лимфатических узлов — с сохраненной структурой ткани и клеточной жизнеспособностью — может помочь в изучении местных и системных иммунных реакций.

Это видео демонстрирует прайминг первичных моноцитов в макрофаги. Первичные моноциты человека могут быть выделены и дифференцированы в М1-подобный провоспалительный фенотип с использованием гранулоцитарно-макрофагального колониестимулирующего фактора (GM-CSF) или в М2-подобный противовоспалительный фенотип с использованием макрофагального колониестимулирующего фактора (M-CSF).

Это видео описывает метод in vitro для получения макрофагов из индуцированных плюрипотентных стволовых клеток человека (iPSCs). Генерация макрофагов из ИПСК происходит в три этапа: (i) агрегация ИПСК в суспензии с образованием трехмерных эмбриоидных телец (БЭ), которые дифференцируются в мезодермальные клетки, (ii) образование клеток-предшественников макрофагов из дифференцированных БЭ и (iii) дифференцировка клеток-предшественников макрофагов в зрелые, функциональные макрофаги.

В этом видео мы демонстрируем процедуру индуцирования дифференцировки и поляризации моноцитов, полученных из периферической крови, в макрофаги M1 или M2. Инкубация с гранулоцитарно-макрофагальным колониестимулирующим фактором, липополисахаридом и интерферон-гамма дает провоспалительные макрофаги М1, в то время как инкубация с макрофагальным колониестимулирующим фактором и интерлейкином-4 индуцирует выработку противовоспалительных макрофагов М2.

Это видео демонстрирует анализ in vitro для получения плазмоцитоидных дендритных клеток (pDCs) из обычных лимфоидных клеток-предшественников (CLP). При совместном культивировании очищенных CLP с γ-облученными фидерными клетками в присутствии Fms-подобной тирозинкиназы-3 лиганда (FL) CLP дифференцируются в неадгезивные pDCs, присутствие которых подтверждается с помощью проточной цитометрии.

Это видео демонстрирует генерацию незрелых, зрелых и толерантных дендритных клеток, или ДК, из моноцитов человека. Инкубация моноцитов с факторами роста и цитокинами приводит к образованию незрелых ДК. В ответ на иммунные регуляторные молекулы незрелые ДК дифференцируются на толерогенные и зрелые ДК.

Это видео демонстрирует дифференцировку стромальных клеток костного мозга (BMSC) в адипоциты. В двухступенчатом процессе, в присутствии специфических факторов роста и гормонов, недифференцированные BMSC сначала дифференцируются в преадипоциты. Второй этап, включающий лечение глюкозой и инсулином, приводит к образованию зрелых адипоцитов с множественными липидными каплями.

Это видео демонстрирует технику дифференцировки мегакариоцитов и образования тромбоцитов. Гемопоэтические стволовые клетки-предшественники, выделенные из пуповинной крови человека, дифференцируются в зрелые мегакариоциты в присутствии тромбопоэтина. Зрелые мегакариоциты продуцируют цитоплазматические расширения, называемые протромбоцитами, которые дают начало отдельным тромбоцитам.

Это видео демонстрирует протокол для генерации функциональных антиген-специфичных Т-клеток из незрелых Т-клеток, полученных из iPSC, с использованием трехмерной системы культивирования тимуса. Совместное культивирование незрелых Т-клеток, полученных из iPSC, с долями тимуса плода плода мышей, истощенных эндогенными лимфоцитами, привело к успешному созреванию Т-клеток с образованием тимусовых эмигрантов (iTEs), полученных из CD8αβ+ MHC класса I+ iPSC.

В этом видео мы описываем протокол очистки тромбоцитов из цельной крови мышей и их последующей активации тромбинистом тромбином. При анализе с помощью проточной цитометрии очищенные покоящиеся тромбоциты характеризуются на основе экспрессии их маркера клеточной поверхности CD41, в то время как очищенные активированные тромбоциты совместно экспрессируют оба поверхностных маркера CD41 и CD62P.

Это видео демонстрирует метод in vitro для создания и изоляции внеклеточных ловушек нейтрофилов (НЭО). Нейтрофилы выделяются из периферической крови и стимулируются форболмиристатацетатом (ФМА) для производства НВЛ. Во время инкубации нейтрофилы подвергаются процессу клеточной смерти (NETosis) для высвобождения НВЛ, содержащих деконденсированный хроматин, смешанный с гранулированными цитоплазматическими белками.

Это видео демонстрирует in vitro дифференцировку гранулоцитарно-макрофаг-колониестимулирующего фактора или GM-CSF-продуцирующих Т-хелперов (THGM). Выделенные наивные Т-клетки стимулируют к дифференцировке вTHGM, что подтверждается обнаружением высокой внутриклеточной продукции GM-CSF и низкой экспрессии других цитокинов, специфичных для Т-хелперных клеток.

Это видео демонстрирует колориметрический анализ для определения дегрануляционной активности тучных клеток. Фермент, выделяемый тучными клетками, гидролизует субстрат и дает цветной продукт. Дегрануляционную активность тучных клеток измеряли как процентное высвобождение ферментов за пределы клетки, нормализованное с общим содержанием ферментов в клетке.

В этом видео мы описываем протокол сортировки на основе проточной цитометрии наивных субпопуляций В-клеток, В-клеток памяти и плазматических плазматических клеток из В-клеток периферической крови человека. Различные субпопуляции В-клеток могут быть различимы на основе связывания антител на основе флуорофоров с рецепторами CD19, CD27 и CD38, экспрессируемыми на поверхности В-клеток, с последующей сортировкой клеток.

Это видео демонстрирует использование анализа ELISpot для оценки функции В-клеток, секретирующих антитела, ASCs. Антитела, секретируемые ASC, взаимодействуют с мембраносвязанными фрагментами поликлональных антител, которые обнаруживаются фермент-конъюгированными антителами IgG или IgM. Цветное пятно, образующееся в каждой лунке, указывает на наличие изотипа конкретного антитела, который коррелирует с секреторной активностью В-клеток.

В этом видео мы описываем протокол выделения одиночных клеток из дренирующих лимфатических узлов поджелудочной железы (PDLN) мыши и характеристику регуляторных Т-клеток (Tregs) из популяции одиночных клеток с помощью проточной цитометрии. Tregs идентифицируются на основе положительной экспрессии маркеров клеточной поверхности CD4, CD25 и Nrp1, а также ядерных транскрипционных факторов Foxp3 и Helios.

Источник: Bello-Gamboa, A. et al., Визуализация иммунологического синапса человека.J. Vis. Exp.(2019)
Это видео демонстрирует исследование in vitro образования иммунологических синапсов между антигенпрезентирующей клеткой и хелперными Т-лимфоцитами с использованием флуоресцентного микроскопа. Т-клеточные рецепторы хелперных Т-лимфоцитов взаимодействуют с комплексом антиген-MHC-II в антигенпрезентирующих клетках и образуют иммунологические синапсы, за которыми следуют движения секреторных...

В этом видео мы демонстрируем метод, основанный на проточной цитометрии, для определения доли цитокин-индуцированных Т-клеток-киллеров, CIK-клеток, полученных из мононуклеарной клеточной культуры периферической крови.

Это видео демонстрирует метод визуализации визуализации in situ секреции интерферона-гамма (ИФН-γ) в селезенке мыши. После бактериальной инфекции и индукции накопления ИФН-γ внутри Т-клеток и естественных киллеров, селезенку собирают у мыши. После получения срезов тканей проводится иммуноокрашивание для визуализации ИФН-γ внутри клеток.

В этом видео мы описываем протокол иммуноокрашивания и визуализации на основе конфокальной микроскопии макрофагальных внеклеточных ловушек (МЕТ) в мышиной легочной ткани. Тканевые резидентные макрофаги характеризуются экспрессией макрофаг-специфичного маркера поверхностного гликопротеина F4/80, в то время как МЕТ визуализируются путем мечения матрицы МЕТ-маркеров металлопротеиназы 9, цитруллинированного гистона H3 и внеклеточного хроматина.

Это видео демонстрирует эффективную технику гомогенизации для создания антиген-адъювантной эмульсии для индуцирования экспериментального аутоиммунного энцефаломиелита (EAE) на мышиной модели. Эмульсия содержит аутоантиген — гликопротеин миелина олигодендроцитов (MOG) — в водной фазе, окруженной непрерывной масляной фазой, содержащей инактивированные патогенные бактерии. Эмульсия обеспечивает пролонгированное высвобождение антигенов для пролонгированного иммунного ответа.

Это видео демонстрирует визуализацию γδ внутриэпителиальных лимфоцитов (IEL) у трансгенных мышей с помощью конфокальной микроскопии. Хирургическая процедура включает в себя создание линии перфорации и выполнение продольного разреза для обнажения слизистой оболочки кишечника и ворсинок. Трансгенные мыши экспрессируют репортерные белки исключительно в γδ IEL, что позволяет отслеживать их. Прижизненная визуализация фиксирует динамическое движение γδ IEL, меченных зелеными флуоресценциями, вдоль...

Это видео демонстрирует генерацию и выделение микрочастиц, полученных из Т-лимфоцитов, НПМ, из Т-лимфоцитов после лечения актиномицином-D.

В этом видео описывается протокол выделения CD8+ Т-клеток с редкими антигенами, специфичными для редких антигенов, с использованием искусственных антигенпрезентирующих клеток (aAPCs) на основе магнитных наночастиц, функционализированных антигенными пептидами MHC-Igs и анти-CD28 антителами. Взаимодействие aAPC с CD8+ Т-клетками, специфически экспрессирующими антигенные пептид-нацеленные Т-клеточные рецепторы, с последующей их экспансией in vitro, приводит к обогащению и расширению этой популяции...

Это видео демонстрирует отделение нейтрофилов от секреции трахеи с помощью микрофлюидного устройства со спиральными каналами. Устройство обеспечивает эффективное разделение в зависимости от размера ячейки за счет использования каналов различной толщины и трапециевидной формы. Взаимодействие между силами приводит к тому, что крупные нейтрофилы накапливаются вблизи внутренней стенки, в то время как эритроциты и агрегаты муцина остаются вблизи наружной стенки, обеспечивая эффективное разделение...

В этом видео мы демонстрируем внутриклеточное радиоактивное мечение Т-хелперов с использованием радиоактивных моноклональных антител, конъюгированных изотопами, для неинвазивной позитронно-эмиссионной томографии.