Method Article

Выделение Т-клеток на основе флотации с использованием сортировки клеток, активируемых плавучестью

July 8th, 2025

In This Article

Abstract

Loading...
$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Источник: Snow, T., et al. Выделение, активация и экспансия Т-клеток на основе флотации из образцов мононуклеарных клеток периферической крови человека с использованием микропузырьков. J. Vis. Exp. (2022)

Это видео демонстрирует выделение Т-клеток из мононуклеарных клеток периферической крови (PBMC) с использованием технологии функционализированной сортировки клеток, активируемых плавучестью (BACS). Метод выделения включает в себя положительный отбор CD3+ Т-клеток путем мечения клеток биотинилированными анти-CD3 антителами и разделения связанных с антителами клеток с помощью микропузырьков, связанных со стрептавидином.

Protocol

Loading...
$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

1. Выделение Т-клеток микропузырьками с помощью положительного отбора

ПРИМЕЧАНИЕ: Этот протокол подробно описывает подход к отбору CD3+ положительных CD3+ с использованием SAMBs.

  1. Инкубировать 3 x 108 коммерчески полученных PBMC в 2,5 мл разделительного буфера с биотинилированным антителом к CD3 (OKT3) в концентрации 25 нг антитела на 1 миллион клеток (25 нг/М). Аккуратно перемешайте, пипетируя вверх и вниз, и выдерживайте при комнатной температуре в течение 10 минут.
  2. Добавьте микропузырьки стрептавидина (SAMBs) в соотношении 0,5 (количество SAMB):1 (количество кле....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Disclosures

Loading...
$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
Конфликт интересов не декларируется.

Materials

List of materials used in this article
NameCompanyCatalog NumberComments
Антитела биотина к человеческому CD3 (OKT3)Биолегенда317320 (Английский
ЛейкопакБиоИВТHUMANLMX100-0001129
Нормальные человеческие PBMCБиоИВТЧЕЛОВЕКХЛПБ-0002562
Набор микропузырьков стрептавидина (включает в себя разделительный буфер Академии)Академия11110-000
)

Reprints and Permissions

Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article

Request Permission

Tags

Buoyancy Activated Cell SortingT Cell IsolationMicrobubble SeparationCD3 Antibody LabelingStreptavidin MicrobubblesPeripheral Blood Mononuclear CellsPositive Cell SelectionCentrifugation SeparationCell Surface MarkersImmune Cell Isolation

Related Articles