Культивирование активированных Т-клеток из мононуклеарных клеток периферической крови человека

Аннотация

Источник: Mølgaard, K., et al. Мониторинг митохондриального дыхания в цитокин-дифференцированных первичных Т-клетках человека в реальном времени. J. Vis. Exp. (2021).

В этом видео мы описываем протокол первичной активации Т-клеток человека. Инкубация наивных Т-клеток с магнитными шариками, покрытыми анти-CD3 и анти-CD28 антителами, с последующим лечением интерлейкином-2 или интерлейкином-15, приводит к активации наивных Т-клеток и их дифференцировке и пролиферации в эффекторные Т-клетки или Т-клетки памяти.

Протокол

Все процедуры с участием людей были выполнены в соответствии с институциональными, национальными и международными рекомендациями по благополучию человека и были рассмотрены местным институциональным наблюдательным советом.

1. Культивирование активированных первичных Т-лимфоцитов человека

1. Размораживание клеток (День 1)
   1. Предварительно нагрейте 10 мл RPMI 1640 на образец примерно до 37 °C.
   2. Возьмите нужное количество ампул мононуклеарных клеток периферической крови и храните их временно на сухом льду.
   3. Ресуспендируйте замороженные клетки в 10 мл предварительно подогретого RPMI 1640.....

Материалы

Список материалов, использованных в этой статье

Имя	Компания	Каталожный номер	Комментарии
24-луночный планшет для культивирования тканей	Нунк	142485
Бусины Anti-CD3xCD28	Gibco	11161Д
Х-ВИВО 15	Лонза	БЭ02-060Ф
Сыворотка крови человека	Сигма Олдрич	Н4522	Нагрев в инактивном состоянии при 56 °C в течение 30 мин
Ил-15	Пепротех	200-02
Ил-2	Пепротех	200-15
Лимфопреп	Технологии стволовых клеток	7801
ПБС	Термо Фишер	10010023
РПМИ 1640	Gibco-Thermo Фишер	61870036
Магнит для шариков DynaMag-2 Магнит	Термо Фишер	12321Д

гг.