Выделение маргинирующих лейкоцитов печени из печени мыши

Аннотация

Источник: Sorski, L., et al. Селективный сбор маргинально-печеночных лейкоцитов. J. Vis. Exp. (2016)

В этом видео мы демонстрируем выделение маргинальных лейкоцитов печени из печени мыши путем принудительной перфузии.

Протокол

Все процедуры, связанные с животными, были проверены местным институциональным комитетом по уходу за животными и ветеринарным наблюдательным советом JoVE.

1. Протокол мыши

1. Перфузия печени и сбор MH-лейкоцитов
   1. Усыпить животное следует при передозировке 8% изофлурана. В качестве меры предосторожности поместите пробирку объемом 15 мл, содержащую пропитанную изофлураном подушечку, вокруг головы мыши до тех пор, пока она не откроет грудную полость.
   2. Прикрепите конечности мыши к кровати.
   3. Откройте брюшинную и грудную полости, чтобы обнажить печень и сердечно-легочный комплекс сразу после прекращения дыхания, сохраняя нижнюю часть диафрагмы нетронутой (для создания бассейна дренажной грудной полости). Избегайте кровотечения во время этого процесса.
      1. В частности, начинайте разрез в нижней части живота по средней линии, не повреждая внутренние органы, и продвигайтесь в обе стороны по диагонали к ребрам, разрезая их до уровня верхней грудной полости.
   4. Вытащите кишки и поместите их снаружи животного справа от экспериментатора, чтобы обнажить воротную вену.
   5. Введите иглу 30 г, соединенную с перистальтическим насосом, в воротную вену рострально к селезеночной вене.
   6. Разрежьте нижнюю полую вену над диафрагмой, чтобы обеспечить дренаж и сбор перфузата из грудной полости.
   7. Включите перистальтическую помпу со скоростью примерно 3 мл/мин и аккуратно соберите первые 3 мл перфузата, загрязненного кровью, из бассейна грудной полости.
   8. Выбросьте этот перфузат. При необходимости повторите такое промывание еще раз, используя физиологический раствор, и только после этого приступайте к сбору перфузата печени.
   9. Повторно инициируйте перфузию со скоростью до 4 мл/мин и соберите 10 мл перфузата из грудной полости с помощью бабочки, подключенной к шприцу.
   10. Прекращают перфузию, когда цвет печени становится светло-коричневым.

2. Экстракция лейкоцитов

1. Центрифугируйте перфузат в течение 10 мин при давлении 400 x г.
2. Аспирируйте надосадочную жидкость.

Материалы

Список материалов, использованных в этой статье

Имя	Компания	Каталожный номер	Комментарии
Перистальтический насос Autoclud
Игла бабочка	ОМГ		26G
Игла бабочка	ОМГ		21G*3/4"
шприц	Решение Pic		1 мл
шприц	Решение Pic		2,5 мл
шприц	Решение Pic		5 мл
шприц	Решение Pic		10 мл
шприц	Решение Pic		25 мл
Щипцы с тупыми краями
ножницы
Гемостат
Тканевые щипцы