Анализ влияния препаратов табачных изделий на продукцию цитокинов с помощью внутриклеточного окрашивания и проточной цитометрии

Аннотация

Источник: Arimilli, S. et al., Методы оценки цитотоксичности и иммуносупрессии препаратов горючих табачных изделий.J. Vis. Exp.(2015)

Это видео демонстрирует влияние препаратов табачных изделий, ТПП, на выработку цитокинов из мононуклеарных клеток периферической крови человека с помощью проточной цитометрии. Лечение клеток ТТП снижает выработку провоспалительных цитокинов, что оценивается после стимуляции липополисахаридами с последующим иммуноокрашиванием и анализом проточной цитометрии.

Протокол

Все процедуры с участием людей были выполнены в соответствии с институциональными, национальными и международными рекомендациями по благополучию человека и были рассмотрены местным институциональным наблюдательным советом.

1. Подготовка к WS-CM

1. Генерируйте цельную дымовую кондиционированную среду (WS-CM), как описано выше.
   1. Приготовьте WS-CM, пропустив дым от четырех эталонных сигарет 3R4F через среду Roswell Park Memorial Institute (RPMI) 1640 без фенолового красителя, используя следующий режим курения: 35-60-2, объем затяжки в мл, интервал затяжки в секундах и продолжительность затяжки в секундах со....

Материалы

Список материалов, использованных в этой статье

Имя	Компания	Каталожный номер	Комментарии
12 трубок по 75 штук	BD Falcon	352058
Конические тубы 15 мл	Корнинг	430790 (Английский
2 мл микропробирок	Аксиген	MCT-150-C-S
Эталонные сигареты 3R4F	Университет Кентукки, Сельскохозяйственный колледж	3R4F
Конические тубы 50 мл	Корнинг	430828
Флакон 500 мл	Корнинг	430282
96-луночный планшет с плоским дном	Termo Nunc	439454
Колпак для клеточных культур	Термо Сайентиал	Серия 1300 A2
центрифуга	Эппендорф	58110Р
Цитофикс/Цитоперм (Permwash)	BD Biosciences	555028	огнеопасный
ФБС	Сигма-Олдрич	Ф2442
Фильтрующий блок	Налген	156-4020
Проточный цитометр	BD Biosciences	FACS Песнь II	8 цветов, Ex 405 и Em785.
Проточный цитометр	BD Biosciences	FACS Calibur	4 цвета на Ex 495 и Em 785.
Программное обеспечение для анализа проточной цитометрии	Древовидная звезда	ФлоуДжо
Контейнер для заморозки	Налген	5100-0001	Содержит ДМСО, раздражающий фактор
ГоглиШтекер	BD Biosciences	555029	Канцероген, Раздражающее, Коррозионное
Антитело к ИФН-γ V-500	BD Горизонт	No 561980	Сенсибилизатор кожи
Буфер изоляции	Изолимф, Научная корпорация CTL	1114868	Легковоспламеняющаяся жидкость, раздражающее вещество
Изопропиловый спирт	Сигма-Олдрич	W292907
L-глютамин	Технологии Gibco Life	No 25030-081
ЛПС	Сигма-Олдрич	Л2630
Антитела к MIP1-α PE	BD Pharmingen	No 554730	Острая токсичность, пероральная
никотин	Сигма-Олдрич	Н3876	Острая токсичность, опасность для окружающей среды
Парафильм	Бемис	«М»
Параформальдегид	Сигма-Олдрич	П6148	Легковоспламеняющиеся, Раздражение кожи
Ручка/стрептококк	Технологии Gibco Life	15140-122
РПМИ 1640	Технологии Gibco Life	11875-093
Работающий буфер	Беговой буфер MACS, Miltenyi Biotech	Тел.: 130-091-221
Антитело к TNF-α Alexa Fluor 488	Биолегенда	502915
Трансферная пипетка	Научный центр Фишера	Телефонный номер 13-711-20

)