Методика оценки иммунного ответа на антиген путем индуцирования воспаления кожи

Аннотация

Источник: Yao, Y., et al. Прижизненная визуализация прайминга нейтрофилов с использованием IL-1β Promoter-driven DsRed Reporter Mice. J. Vis. Exp. (2016).

Это видео демонстрирует метод in vivo для оценки тестового антигена путем индуцирования воспаления кожи на мышиной модели. Тестируемый антиген — гаптен в растворе масла/ацетона — местно наносится на кожу уха мыши, и воспаление кожи оценивается через соответствующий период

.

Протокол

Все процедуры, связанные с животными, были проверены местным институциональным комитетом по уходу за животными и ветеринарным наблюдательным советом JoVE.

1. Индукция воспаления кожи у мышей pIL1-DsRed

1. Обезболивайте мышей путем внутрибрюшинного (внутримышечно) введения обезболивающего коктейля, содержащего 100 мг/кг кетамина, 10 мг/кг ксилазина и 1 мг/кг ацепромазина. Мыши, находящиеся под адекватной анестезией, не демонстрируют отведения задней лапы до защемления пальцев ног.
2. Нанесите крем для удаления волос на тыльную поверхность обоих ушей мыши. Подождите от 30 секунд до 1 минуты. Протрите поверхность ушей ватой, смоченной в воде, и дайте высохнуть на воздухе.
3. Измерьте толщину уха с помощью микрометра и поместите мышь в отдельную клетку. Наблюдайте до выхода из наркоза (~15 - 30 мин). Чтобы устранить воспаление кожи, вызванное средством для удаления волос, дайте мыши отдохнуть в течение 3 дней, прежде чем проводить дальнейшие эксперименты.
4. Приготовьте 1,25% оксазолон (OX) путем растворения 16,7 мг OX в 1 мл ацетона и смешивания 750 μл раствора OX/ацетона с 250 μл оливкового масла. Приготовьте раствор для автомобиля, смешав 750 μл ацетона с 250 μл оливкового масла.
5. Повторная анестезия мышей путем внутрибрюшинного (в/в) введения анестезирующего коктейля (1.1). Измерьте толщину уха, как и раньше.
6. Нанесите 12,5 мкл 1,25% OX на каждую сторону правого уха. Нанесите по 12,5 мкл раствора ацетона/оливкового масла на каждую сторону левого уха.
7. Держите мышь отдельно от соседей по клетке до полного выздоровления, чтобы предотвратить нанесение вреда ее ушам другими мышами, затем замените мышь в ее первоначальной клетке и верните ее в помещение для содержания животных.
   заметка: Эпиляция может привести к незначительному воспалению кожи с последующим изменением толщины уха. Это незначительное воспаление пройдет через 3 дня, что подтвердится нормальной толщиной уха. После местного применения в течение 24 часов у ушей, обработанных методом OX, наблюдается значительный (p < 0,01) отек по сравнению с ушами, обработанными только автомобильным раствором.

Материалы

Список материалов, использованных в этой статье

Имя	Компания	Каталожный номер	Комментарии
Кетамина гидрохлорид	Хоспира	НДЦ 0409-2051-05
Ксилазин	Лаборатория Ллойда	НАДА #139-236
Ацепромазин	Берингер Ингельхайм	АНАДА 200-361
Крем для эпиляции	Черч и Дуайт
ацетон	Научный центр Фишера	А16П4
Оксазолон	Сигма-Олдрич	Е0753