Создание эксцизионной раны кожи у мышиной модели с помощью пункционной биопсии

Аннотация

Источник: Андерсон, Л. С. и др., Мышиная модель для оценки врожденного иммунного ответа на инфекцию Staphylococcus aureus. J. Vis. Exp. (2019)

Это видео демонстрирует процедуру пункционной биопсии для создания точной раны в модели мыши. При иссечении обнажается подкожный слой кожи, обеспечивая подходящее место для изучения иммунных реакций на локализованную патогенную инфекцию.

Протокол

Все процедуры, связанные с животными, были проверены местным институциональным комитетом по уходу за животными и ветеринарным наблюдательным советом JoVE.

1. Источник и корпус мыши

1. Получите мышей, усиленных лизоцимом M-зеленым флуоресцентным белком (LysM-eGFP) на генетическом фоне C57BL/6J, как описано ранее. Получить первичный ответ миелоидной дифференцировки LysM-EGFP× 88 (MyD88)-/- мышей путем скрещивания мышей LysM-EGFP с мышами MyD88-/- на фоне C57BL/6J.
2. Домашние мыши в виварии. Для этих исследований животные были размещены в Калифорнийском университете в Дэвисе группами до операции и отдельно после операции. Используйте мышей в возрасте от 10 до 16 недель.

2. Иссечение кожи

1. Введите 100 мкл 0,03 мг/мл бупренорфина гидрохлорида (~0,2 мг/кг) каждой мыши путем внутрибрюшинной инъекции.
2. Через двадцать минут после инъекции поместите 2-4 мыши в камеру с 2-3 литрами в минуту (LPM) кислорода с 2-4% изофлураном. После того, как мыши будут полностью обезболены, переводите мышей по одной в носовой конус, подключенный к 2-3 LPM кислорода с 2-4% изофлураном. Убедитесь, что мыши полностью обезболились, сильно зажав каждую заднюю лапу между большим и указательным пальцами. Приступайте к следующему шагу, если животное не реагирует на щипки.
3. Выбрейте участок размером 1 на 2 дюйма на задней стороне мыши с помощью электрических машинок для стрижки и очистите область от обрезков шерсти с помощью чистой салфетки или марли. Избегайте использования лосьона для депиляции, потому что это может вызвать чрезмерное воспаление.
4. Очистите заднюю часть мыши сначала марлей, пропитанной 10% повидон-йодом, а затем марлей, пропитанной 70% этанолом. Очистите область по спирали, двигаясь наружу от центра операционной области. Подождите примерно 1 минуту, пока операционная область высохнет перед операцией.
5. Свободно держите выбритую заднюю часть мыши между двумя пальцами и плотно прижмите стерильную 6-миллиметровую пробивную биопсию в центр подготовленной хирургической области. Не натягивайте кожу.
   1. Поверните пуансонную биопсию, чтобы создать круговой контур на коже, который полностью прорезает кожу по крайней мере на одном участке контура. Будьте осторожны, чтобы не порезать подлежащую фасцию или ткань.
   2. С помощью стерильных ножниц и щипцов разрежьте эпидермис и дерму по круговому рисунку, отпечатанному пункционной биопсией.

Материалы

Список материалов, использованных в этой статье

Имя	Компания	Каталожный номер	Комментарии
6 мм одноразовый пуансон для биопсии	Интегра Милтекс	33-36
Бупренопрхина гидрохлорид инъекционный	Западное медицинское снабжение	7292	0,3 мг/мл
Мыши C57BL/6J	Лабраторий Джексона	664
Мыши LysM-eGFP	Томас Графф Колледж Альберта Эйнштейна в Нью-Йорке	NA
Мыши MyD88 KO	Лабраторий Джексона	9088
Губки нетканые	AMD- Ритмед Инк	А2101-Ч	5 см х 5 см
Повидон йод 10% раствор	Апликаре	697731

шт.