Для просмотра этого контента требуется подписка на JoVE. Войдите или начните свой бесплатный пробный период.

Методическая статья

Извлечение лизата клетки-хозяина из инфицированных клеток-хозяев, культивируемых в проницаемой мембранной системе

652 просмотров

8 июля 2025 г.

В этой статье

Аннотация

Источник: Flaherty, R. A., et al. Реализация системы инфицирования на основе проницаемой мембранной вставки для изучения воздействия секретируемых бактериальных токсинов на клетки хозяина млекопитающих. J. Vis. Exp. (2016).

Это видео демонстрирует систему проницаемых мембранных вставок для исследования воздействия бактериальных токсинов на клетки хозяина контролируемым и изолированным образом. Этот подход позволяет селективно подвергать клетки воздействию токсинов, сохраняя при этом физическое разделение, которое имитирует естественное взаимодействие хозяина и патогена.

Протокол

1. Бактериальная культура

  1. Получение изогенных мутантных штаммов для использования для изучения специфического секретируемого фактора, представляющего интерес.
    заметка: В GASM1T1 5448 штаммов стрептококка, использованных для этих экспериментов, были WT GAS', мутант с дефицитом sagAΔ cat SLS (сокращенно в тексте ΔsagA) и штамм с дополнением sagA (сокращенно в тексте ΔsagA+sagA).
  2. Готовьте в течение ночи жидкие культуры интересующих штаммов бактерий. Выращивайте штаммы GAS M1T1 5448 в -10 мл бульона Тодда-Хьюитта при температуре 37°C в течение 16-20 часов п....

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Раскрытие информации

Конфликт интересов не декларируется.

Материалы

Список материалов, использованных в этой статье
ИмяКомпанияКаталожный номерКомментарии
Эпителиальные кератиноциты человека HaCaTПодарок от лаборатории Виктора Низета.
Модифицированная орлиная среда Дульбекко (DMEM)Технологии Life11995-073Используйте подходящие среды для интересующей клеточной линии.
Фетальная бычья сыворотка (FBS)БиозападС162НИспользуйте соответствующие добавки для клеточной линии, представляющей интерес.
Чашки для культивирования тканей 10 смНунк150350 (АнглийскийПодойдут и другие бренды.
6-луночные чашки для культивирования тканейCytoOneСС7682-7506Другие бренды подходят, но должны быть совместимы со вставкой Corning.
Вкладыши Transwell 0,4 мкм с коллагеновым покрытием (6 лунок)КорнингNo 3540
Вкладыши Transwell 0,4 мкм с коллагеновым покрытием (24 лунки)КорнингNo 3595
Скребки для ячеекФишербрандТел.: 08-100-241Они необходимы только для сбора клеточных лизатов.
Заменитель Nonidet P40сигма74385-1ЛДругие поставщики подойдут.
)

Теги

Sp38 MAPK