Method Article

Сывороточный бактерицидный анализ на комплемент-опосредованную бактерицидную активность антител

July 8th, 2025

In This Article

Abstract

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Источник: Weerts, H. P., et al. A Высокопроизводительный бактерицидный анализ, специфичный для шигеллы. J. Vis. Exp. (2019).

Это видео демонстрирует метод оценки комплемент-опосредованной бактерицидной активности антител, присутствующих в сыворотке. Этот подход сочетает в себе изолированную сыворотку с патогенными бактериями и экзогенными белками комплемента. После инкубации бактерии выращивают на агаровой тарелке, а полученные колонии количественно оценивают для измерения бактерицидного титра сыворотки.

Protocol

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

1. Готовьте комплемент и целевые бактерии

  1. Подготовьте крольчатина комплемента (BRC)
    ПРИМЕЧАНИЕ:     Подробные критерии выбора дополнительного лота можно найти здесь: https://www.vaccine.uab.edu/uploads/mdocs/UAB-MOPA.pdf
    1. Получить замерзший BRC и разморозить проточной холодной водой. Физически перемешивайте BRC каждые ~10-20 минут до полного оттаивания. Не подвергайте BRC повторным циклам замораживания-оттаивания.
    2. Во время размораживания BRC наклейте этикетку на центрифужные пробирки объемом 1,5 мл, 5 мл или 15 мл. Поместите пробирки с маркировкой на лед для предварительного охлаждения. Внесите нуж....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Results

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

figure-results-1
Рисунок 1: Пластины LBA после проявления цвета. Бактериальные микроколонии представителя S. flexneri 3a за ночь выросли до соответствующих размеров. Был добавлен оверлейный агар, и колонии приобрели красный цвет за счет уменьшения соединения TTC в наложенном агаре.

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Disclosures

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
Конфликт интересов не декларируется.

Materials

List of materials used in this article
NameCompanyCatalog NumberComments
желатинсигмаГ9391Тип В, порошок, биореагент, подходит для клеточной культуры
ТТХ (2,3,5-трифенилтетразолия хлорид)сигмаТ8877≥98,0% (ВЭЖХ)
Азид натрия (NaN3)сигмаС2002≥99,5%
Дополнение для кроликаПелФриз31061-33-4 недели
HBSS с Ca2+/Mg2+Инвитроген14065-56Без фенола красного
Л.Б. Агар (Леннокс)сигмаЛ2897Порошковая микробная среда для роста
Бакто-агарБДNo 214010Порошкообразный, (C12H18O9)н
глицеринсигмаГ5516Для молекулярной биологии ≥99%
LB Бульон (Леннокс)сигмаЛ3022Порошковая микробная среда для роста
Квадратная чашка ПетрисигмаZ617679-240 шт.120 мм x 120 мм
Пробирная пластинаКостарNo 3799Пластина с U-образным дном на 96 лунок с крышкой
Программное обеспечение NICEУниверситет Алабамы в Бирмингемеftp://ftp.nist.gov/pub/physics/mlclarke/NICE/
гг.

Reprints and Permissions

Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article

Request Permission

Tags

Serum Bactericidal AssayComplement Mediated Bactericidal ActivityAntibody LPS BindingSerial Dilution ProtocolBacterial Colony EnumerationTTC Overlay AgarHeat Inactivated ComplementMicrobiological IncubatorDigital Colony AnalysisGram Negative Bacteria

Related Articles