Для просмотра этого контента требуется подписка на JoVE. Войдите или начните свой бесплатный пробный период.

Методическая статья

Оценка вирулентности Leishmania в культивируемых макрофагах

1.3K просмотров

⸱

8 июля 2025 г.

В этой статье

Аннотация

Источник: Sarkar, A. et al., Количественная оценка внутриклеточного роста внутри макрофагов является быстрым и надежным методом оценки вирулентности паразитов Leishmania.J. Vis. Exp.(2018)

В этом видео исследуется вирулентность лейшмании путем обработки макрофагов метациклическими промастиготами, что приводит к образованию внутриклеточных амастигот. Подтверждение вирулентности Leishmania достигается путем окрашивания флуоресцентными красителями нуклеиновых кислот. Это понимание может способствовать разработке новых методов лечения лейшманиоза.

Протокол

Все процедуры, связанные с животными, были проверены местным институциональным комитетом по уходу за животными и ветеринарным наблюдательным советом JoVE.

1. Выделение и дифференцировка макрофагов, полученных из костного мозга (BMM)

  1. День 0: Принесите в жертву 4 - 6-недельную самку мыши C57BL/6 или BALB/c в камере CO2 и подтвердите смерть от вывиха шейки матки. Обеспечьте стерилизацию ножниц и щипцов, пропитав их 70% этанолом. Распыляйте перчатки с 70% этанолом, чтобы обеспечить стерильное обращение на протяжении всего процесса выделения клеток костного мозга.
  2. ....

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Результаты

figure-results-1
Рисунок 1: Репрезентативная иллюстрация ВММ-инфекции вирулентными аксеническими амастиготами (А) и невирулентными логарифмическими промастиготами (В) L. amazonensis.Иммунофлуоресцентные изображения макрофагов, выделенных у мышей BALB/c через 1 ч и 48 ч после заражения. Инфицированные макрофаги обрабатывали на иммунофлюоресценцию, как описано в протоколе. ФВ-мембраны окрашивали монок.......

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Раскрытие информации

Конфликт интересов не декларируется.

Материалы

Список материалов, использованных в этой статье
ИмяКомпанияКаталожный номерКомментарии
6-луночный планшет для культивирования клетокСеллстар657160 (Английский
АденинАкрос ОрганикAC147440250
Наконечники для дозаторов с аэрозольным барьером (100-1000 мкл)Фишербранд02-707-404 (Английский
Наконечники для пипеток с аэрозольным барьером (20-200 μл)Фишербранд02-707-430 (Английский
Аэрозольные барьерные наконечники для пипеток (2-20 мкл)ФишербрандТел.: 02-707-432
Bard-Parker ребристая спинка из углеродистой стали хирургическое лезвие # 10Аспен Хирургический371110 (Английский
Шприц BD Luer-Lok Tip 10 млБектон Дикинсон (BD)309604
Игла BD Precisionglide, 25 г Бектон Дикинсон (BD)305124
Чашка для клеточных культур 35 мм x 10 ммСеллстарТелефон: 627 160
Колба для клеточных культурСеллстар660175
Защитные стекла: круги 12 ммФишербрандТел.: 12-545-80
DAPI (4',6-диамидино-2-фенилиндол, дигидрохлорид)ИнвитрогенД1306
D-биотинДжей Ти БейкерС272-00
ЭдтаСигма ОлдричЭЦП
Этиловый спирт 200 пробыФармко-ААПЕР111000200
Чаша Петри из полистирола Falcon 100 мм x 15 ммКорнинг351029
Фетальная бычья сывороткаСерадигм1500-500
Фиколл400Сигма ОлдричФ8016
Флуоресцентный микроскопКомпания NikonЕ200
Козий антимышь IgG Техасский красныйИнвитрогенТ-862
Козий антикроличий IgG AlexaFluor488ИнвитрогенА-11034
ХеминТокийская химическая промышленностьН0008
ГЕПЕС (1М)Gibco15630-080 (Английский)
Разбавитель Isoton IIБекман Коултер8546719
L-глютаминБлизнецы400-106
Средний 199 (10X)Gibco11825-015
На пируват (100 мМ)Gibco11360-070 (Английский)
ПараформальдегидАльфа Аэсар43368
Пенициллин/стрептомицинБлизнецы400-109
Фосфатно-солевой буфер (-/-)ТермоФишер14200166
Полипропилиновые конические центрифужные пробирки 15 млСеллстар188 271
Полипропилиновые конические центрифужные пробирки 50 млСеллстарТелефон: 227 261
Реагент ProLong Gold против выцветанияТермоФишерП36930
Антитело к мышам Lamp-1 от крысыИсследования в области развития, Банк гибридома1Д4Б
Рекомбинантный М-КСФ человекаПепроТех300-25
Гемоцитометр Райхерта с яркой линией Хауссер Сайентиал1492
RPMI Medium 1640 (1X)Gibco11875-093
Тритон Х-100 Поверхностно-активное веществоМиллипора СигмаТХ1568-1
Трипан синийСигма ОлдричТ8154
Изящные ножницы, 4 1/2"ВВР82027-582
Щипцы для рассечения, тонкий наконечникВВР82027-386
Предметные стекла для микроскопаВВР16004-368
Z1 Счетчик частиц сошников, двойной порогБекман Коултер6605699
) ) ) ) г.

Больше статей

Инфицирование макрофаговвнутриклеточные паразитыфлуоресцентная микроскопияокрашивание DAPIмакрофаги костного мозгадифференцировка паразитовнакопление F-актинаповышение экспрессии гепсидинаокрашивание нуклеиновых кислот