Процедура обрезки хвоста мыши для забора периферической крови и выделения плазмы

Аннотация

Источник: Coats, J. S. et al., Экспрессия экзогенных цитокинов в ксенотрансплантатах, полученных от пациентов, путем инъекции с цитокин-трансдуцированной стромальной клеточной линией. J. Vis. Exp. (2017)

В этом видео мы демонстрируем процедуру обрезания хвоста на мышиной модели для сбора периферической крови. Собранная кровь впоследствии подвергается центрифугированию для отделения плазмы, которая может быть использована для дальнейших экспериментов.

Протокол

Все процедуры, связанные с животными моделями, были рассмотрены местным институциональным комитетом по уходу за животными и ветеринарным наблюдательным советом JoVE.

1. Серийный сбор крови и мониторинг плазмы на экзогенные цитокины человека у мышей

1. Забор крови с помощью ножницы хвоста
   1. Продезинфицируйте капюшон и соберите удерживатель для мыши, ножницы и другие инструменты/принадлежности для процедуры.
   2. Поместите мышь в ограничитель и закрепите трубку, чтобы свести к минимуму движение мыши.
   3. Продезинфицируйте хвост и хирургические ножницы изопропиловым спиртом. Нанесите на хвост местный обезболивающий крем.
   4. С помощью очень острых хирургических ножниц отрежьте примерно 0,5 – 1 мм кончика хвоста мыши. Соберите около 80 мкл периферической крови с помощью гепаринизированных капиллярных трубок.
      заметка: Если кровь будет собираться с помощью этого метода более шести раз, удаление хвоста должно быть консервативным по отношению к количеству удаляемого хвоста. По мере продвижения ножниц вверх по хвосту диаметр увеличивается, он быстрее кровоточит, а заживление занимает больше времени.

2. Разделение плазмы

1. Перелейте кровь с помощью шприца с колбом (чтобы вытолкнуть ее из капиллярных трубок) в пробирку с маркировкой K₂EDTA; переверните 20 раз, чтобы предотвратить свертывание><. заметка: Как правило, свертывание крови из хвостового укуса происходит быстро. Однако, если кровотечение продолжается дольше ~ 2 минут, используйте кровоостанавливающий карандаш/порошок для облегчения коагуляции.
2. Центрифугируйте пробирки для забора крови в соответствии с инструкцией производителя и апикируйте плазму для хранения (-20 °C) до готовности к дальнейшему анализу.

Материалы

Список материалов, использованных в этой статье

Имя	Компания	Каталожный номер	Комментарии
Имплантируемый для животных нанотранспондер с канюлей	Трован	ИД-100Б(1.25)
Обезболивающий крем с лидокаином EMLA (получен путем презипции в учреждении по уходу за животными)	предписание	предписание
BD 1/2 cc LO-DOSE U-100 Шприц для инсулина 28G1/2	БД	#329461
Трубки BD Microtainer с K2EDTA	БД	#365974
центрифуга	Бекман Коултер	Алегра Х-15Р
Капиллярные трубки FisherBrand (гепаринизированные)	Научный центр Фишера	Тел.: 22-260-950
Гемоцитометр	рыбак	02-671-6 (английский
MACSQuant Analyzer 10	Милтеньи Биотек	Тел.: 130-096-343
Клетка для мышиного пирога	Брейнтри Сайентикал, Инк.	МПЦ-1
Ограничитель подсветки хвоста мыши	Брейнтри Сайентикал, Инк.	MTI STD
Имплантер пистолетной рукоятки	Трован	ИМ-300(1.25)
"NSG мыши" NOD. Cg-Prkdcscid Il2rgtm1Wjl/SzJ, мужской или женский, возраст 6 – 8 недель	Мыши JAX	# 005557

)