Method Article
July 8th, 2025
Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.
Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
|---|---|---|---|
| Акции дрозофил | |||
| вездесущий E-кадгерин с тегом GFP; ubi-p63E-shg.GFP; (chrII) | Киотский фондовый центр, DGRC | #109007 | Последовательности промоторов Ubi-p63E управляют экспрессией E-кадгерина дрозофилы (дробовик), помеченного на С-концевом конце GFP. |
| вездесущий E-кадгерин с тегом GFP; Ubi-p63E-shg.GFP (III) | Блумингтонский центр дрозофил (Университет Индианы) | #58742 | Последовательности промоторов Ubi-p63E управляют экспрессией E-кадгерина дрозофилы (дробовик), помеченного на С-концевом конце GFP. |
| Вездесущий тег GFP Moesin P{sGMCA}3.1 | Блумингтонский центр дрозофил (Университет Индианы) | #59023 | Повсеместно экспрессируемый промотор/энхансер sqh стимулирует экспрессию фрагмента моэзина (который включает в себя актин-связывающие последовательности), помеченного GFPS65T. |
| Гемоциты, специфичные для змеи-Gal4 драйвера; srp-Gal4; | Автор: Катя Брукнер | Автор: Катя Брукнер | Экспрессия Scer\GAL4, слитого с полиА-хвостом, контролируется 2 геномными последовательностями из восходящего течения змеи дрозофилы. Источник: Brückner, K., Kockel, L., Duchek, P., Luque, C.M., Rørth, P., Perrimon, N. Рецептор PDGF/VEGF контролирует выживаемость клеток крови у дрозофил. Ячейка разработки. 7 (1), 73–84, doi: 10.1016/j.devcel.2004.06.007 (2004). |
| UAS-nuclearRFP w1118; P{UAS-RedStinger}6 | Блумингтонский центр дрозофил (Университет Индианы) | #8545 или #8547 | Регулирующие последовательности БАС управляют экспрессией формы RFP DsRed.T4, которая помечается на С-концевом конце сигналом ядерной локализации |
| UAS-цитоплазматический GFP ;; P{UAS-GFP. С65Т} | Блумингтонский центр дрозофил (Университет Индианы) | Доступно несколько акций (например, #1522) | Экспрессия GFP версии S65T с помощью регуляторных последовательностей БАС; вариант S65T демонстрирует повышенную яркость. |
| UAS-photoconvertibleKaede w1118; P{UAS-Kaede.A}3 | Блумингтонский центр дрозофил (Университет Индианы) | #26161 | Белок каэде излучает ярко-зеленую флуоресценцию после синтеза, но эффективно изменяется на яркую стабильную красную флуоресценцию при облучении ультрафиолетом. |
| Спагетти-кабачок с тегом GFP w1118; P{sqh-GFP.RLC} | Блумингтонский центр дрозофил (Университет Индианы) | #57145 | Область кодирования sqh, которая помечена на С-концевом конце тегом T:Avic\GFPS65T, экспрессируется под контролем естественного промотора sqh. |
| Ингредиенты для пищевых сред для мух | Пищевые среды от мух изготавливаются в соответствии со стандартными процедурами (см. Greenspan, R. 1997. Толкание мух: теория и практика генетики дрозофилы. Cold Spring Harbor Press. 1-191 стр.) | ||
| кукуруза | Wild Oats, Бристоль, Великобритания (или аналогичный поставщик) | Связаться с поставщиком напрямую | органический |
| Соевая мука | Wild Oats, Бристоль, Великобритания (или аналогичный поставщик) | Связаться с поставщиком напрямую | органический |
| Солодовый экстракт | Wild Oats, Бристоль, Великобритания (или аналогичный поставщик) | Связаться с поставщиком напрямую | органический |
| патока | Wild Oats, Бристоль, Великобритания (или аналогичный поставщик) | Связаться с поставщиком напрямую | органический |
| Агар Difco | BD Biosciences, Fisher Scientific | ДФ0142-15-2 | Для приготовления корма для мух |
| Пропионовая кислота | сигма | 402907 | Для приготовления корма для мух |
| Нипаген | сигма | 79721 | Для приготовления корма для мух |
| Сухие хлебопекарные дрожжи | Редстар, Датчер Сайентикал, Великобритания Лтд | Редстар, Датчер Сайентикал, Великобритания Лтд | Для приготовления корма для мух |
| Подготовка образцов и монтаж | |||
| Парафильм | сигма | П7793-1ЭА | Для приготовления гептанового клея |
| Тонкая кисть из соболя | Дейлер-Роуни (или эквивалент) | #0 или 1 | |
| щипцы | Fisher Scientific (или Fine Science Tools) | NC9404145 | Дюмон #5 |
| Посуда со стеклянным дном для визуализации | МатТек | П35Г-0-10-С | Мы рекомендуем использовать чашки Петри 35 мм, с микролункой не менее 10 мм, покровным стеклом 0,085-0,13 мм, без покрытия. Чашки с более крупными микролунками позволят монтировать и визуализировать все большее количество куколок в одном эксперименте. |
| гептан | сигма | 51730-5МЛ | Для приготовления гептанового клея |
| Двусторонняя липучая лента (например, скотч) | Агар Сайентифик | АГГ263 | Для приготовления гептанового клея |
| Тюбик 50 мл (для гептанового клея) | Трубки Falcon от Fisher Scientific | Телефонный номер 14-432-22 | Для приготовления гептанового клея |
| Предметные стекла для микроскопа | Агар Сайентифик | AGL4244 | Для вскрытия куколок дрозофилы |
| Препарирующий стереомикроскоп со светлым полем | Leica (или аналогичная) | М50 | Для вскрытия куколок дрозофилы |
| Микроножницы | Джон Вайс Интернэшнл | 103123 | Миниатюрные исследовательские ножницы (прямые) |
| Лазерная абляция и визуализация | |||
| Нитогенный абляционный лазер | Спектрофизика (или эквивалент Андора) | Модель VSL-337ND-S | Для ранения его следует прикрепить к широкопольной системе визуализации |
| Мультилазерный конфокальный лазерный сканирующий микроскоп (КЛСМ) | Leica (или аналогичная) | TCS AOBS SP8 или SP5-II, прикрепленный к инвертированному эпифлуоресцентному микроскопу Leica DMi8 (или аналогичному) | В идеале включает в себя моторизованный столик для многосайтового и «мозаичного» сканирования, а также «гибридные» детекторы GaAsP (которые обеспечивают гораздо большую чувствительность и усиление слабого сигнала) |
| Экологическая камера | Услуги по визуализации жизни (или эквивалентные) | "Система контроля температуры микроскопа" | Прикреплен к конфокальному микроскопу для контроля температуры во время визуализации |
| Программное обеспечение для анализа изображений | |||
| Программный модуль FRAP | Leica (или аналогичная) | Программный модуль CLSM FRAP | Для выполнения фотоконвертации фотоконвертируемых флуорофоров, таких как Kaede |
| ImageJ (программное обеспечение для анализа изображений) | Национальные институты здравоохранения (NIH) | https://imagej.nih.gov/ij/ | Шнайдер, К.А., Расбанд, В.С., Элисейри, К.В. "NIH Image to ImageJ: 25 лет анализа изображений". Nature Methods 9, 671-675, 2012. |
| Плагин ImageJ "Ручное отслеживание" | Национальные институты здравоохранения (NIH) | https://imagej.net/Manual_Tracking | |
| Плагин ImageJ "TrackMate" | ImageJ, NIH | https://imagej.net/TrackMate | Тиневез, штат Нью-Йорк; Перри, Н. и Шинделин, Д. и др. (2016), "TrackMate: открытая и расширяемая платформа для отслеживания одиночных частиц.", Методы 115: 80-90, PMID 27713081 |
| Volocity (высокопроизводительное программное обеспечение для 3D-визуализации) | Перкин Элмер | Волатильность 6.3 | Для анализа изображений |
| IMARIS (программное обеспечение для анализа изображений) | Битовая плоскость | IMARIS для клеточных биологов | Для анализа изображений |
Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article
Request Permission